Terreni per biologia molecolare
2YT Autoinducible Growth Medium w/o Trace Elements
Per far crescere ceppi batterici a espressione inducibile con IPTG.
- Codice
- LC-2093
- Categoria
- Terreni per biologia molecolare
- Formato
- 500 g
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 15 mesi
I terreni ad autoinduzione furono formulati e sviluppati per la prima volta da W. Studier per coltivare ceppi di espressione inducibili con IPTG. Il principio dei terreni ad autoinduzione si basa su fonti di carbonio del terreno che vengono metabolizzate in modo differenziato, per favorire la crescita cellulare ad alta densità e indurre automaticamente l'espressione delle proteine dai promotori lac.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Espressione di proteine in Escherichia coli.
Settori
Terreni di coltura per biologia molecolare.
Preparazione
45,85 g in un litro di acqua distillata; far bollire per un minuto, sterilizzare in autoclave a 115 °C per 20 minuti.
Principio e uso
I terreni ad autoinduzione contengono come fonte di carbonio sia il glucosio sia il lattosio. Una concentrazione limitata di glucosio viene metabolizzata preferenzialmente durante la crescita, e questo impedisce l'assorbimento del lattosio finché il glucosio non si esaurisce, di solito tra la metà e la fine della fase logaritmica. Quando il glucosio si esaurisce, il lattosio può essere assorbito e convertito dall'enzima beta-galattosidasi nell'induttore allolattosio. L'allolattosio provoca il distacco del repressore lac dai suoi siti di legame specifici nel DNA e induce così l'espressione della T7 RNA polimerasi dal promotore lacUV5 e sblocca i promotori T7lac, permettendo l'espressione delle proteine bersaglio da parte della T7 RNA polimerasi.
Con i terreni ad autoinduzione, la crescita cellulare ad alta densità è seguita da un'induzione spontanea dell'espressione delle proteine. Non è necessario controllare la densità cellulare e non c'è l'induzione convenzionale con IPTG. La crescita in parallelo di molte colture non indotte o autoindotte è possibile perché le colture vengono semplicemente inoculate e fatte crescere fino a saturazione. È un grande vantaggio pratico e semplifica l'induzione e l'analisi, manuali o automatizzate, di più cloni rispetto all'induzione convenzionale con IPTG, che richiede di controllare la crescita di ogni coltura e di aggiungere l'induttore nella fase di crescita giusta.
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Polvere fine |
| Colore del terreno disidratato | Beige |
| Colore del terreno preparato | Ambra |
| pH finale (25 °C) | 7,0 ± 0,1 |
| Quantità per litro | 45,85 g |
| Conservazione | da 2 a 25 °C |
Formula
| Componente | g/L |
|---|---|
| Glucosio | 0,5 |
| Solfato di ammonio | 3,3 |
| Fosfato disodico | 7,1 |
| Solfato di magnesio | 0,15 |
| Fosfato monopotassico | 6,8 |
| Triptone | 16 |
| Estratto di lievito | 10 |
| Alpha-lattosio | 2 |
Preparazione e uso
Preparazione
Sospendere 45,85 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 115 °C per 20 minuti. Mescolare bene e distribuire in contenitori adatti.
Istruzioni per l'uso
- Consultare i riferimenti appropriati per le procedure di prova raccomandate.
- Incubare a una temperatura di 35 ± 2 °C per 18-24 ore.
Controllo qualità
Prova microbiologica
Condizioni di incubazione: 35 ± 2 °C / 18-24 h.
| Microrganismo | Specifica |
|---|---|
| Escherichia coliATCC 23724 | Crescita buona |
| Escherichia coliATCC 33694 | Crescita buona |
| Escherichia coliATCC 33849 | Crescita buona |
| Escherichia coliATCC 39403 | Crescita buona |
| Escherichia coliATCC 47014 | Crescita buona |
Bibliografia
- Studier, F. W. 2005. Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures. Protein expression and purification 41: 207-234.
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