Terreni per biologia molecolare
Luria Agar with Ampicillin 50 µg/ml (Miller’s LB Agar)
Per E. coli negli studi di genetica molecolare.
- Codice
- LC-2086
- Categoria
- Terreni per biologia molecolare
- Formato
- 500 g
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 12 mesi
Luria Agar with Ampicillin 50 µg/mL (Miller’s LB Agar) è usato per la crescita selettiva dei ceppi ricombinanti di E. coli resistenti all'ampicillina negli studi di genetica molecolare.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Selezione dei trasformanti di Escherichia coli.
Settori
Terreni di coltura per biologia molecolare.
Preparazione
40 g in un litro di acqua distillata; far bollire per un minuto, non surriscaldare, non sterilizzare in autoclave.
Principio e uso
Gli E. coli trasformati vengono seminati direttamente su terreni agarizzati selettivi (LB Agar contenente l'antibiotico), dove compariranno meno colonie trasformate per mL seminato. Per selezionare i batteri con il plasmide, è necessario trapiantare un inoculo da LB Agar a un LB Broth con l'antibiotico aggiunto.
Il triptone fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il cloruro di sodio fornisce l'equilibrio osmotico. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Polvere fine |
| Colore del terreno disidratato | Beige |
| Colore del terreno preparato | Ambra, leggermente opalescente |
| pH finale (25 °C) | 7,0 ± 0,2 |
| Quantità per litro | 40 g |
Formula
| Componente | g/L |
|---|---|
| Ampicillina | 0,05 |
| Agar batteriologico | 15 |
| Cloruro di sodio | 10 |
| Triptone | 10 |
| Estratto di lievito | 5 |
Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.
Preparazione e uso
Preparazione
Sospendere 40 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Non surriscaldare. Non sterilizzare in autoclave. Raffreddare a 45-50 °C, mescolare bene e distribuire in piastre.
Istruzioni per l'uso
- Eseguire la procedura sperimentale secondo l'uso o lo scopo appropriato.
- Inoculare e incubare a 35 ± 2 °C per 18-24 ore.
Controllo qualità
Prova microbiologica
Condizioni di incubazione: 35 ± 2 °C / 18-24 h.
Condizioni di inoculo: produttività quantitativa (100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC) / selettività (10⁴-10⁶ UFC).
Terreno di riferimento: TSA.
| Microrganismo | Specifica |
|---|---|
| Escherichia coli DH5 alpha + pUC19 | Crescita buona, > 50 % |
| Escherichia coliATCC 25922 | Inibizione totale |
| Escherichia coliATCC 8739 | Inibizione totale |
Bibliografia
- Atlas, R.M., L.C. Parks (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London.
- The condensed protocols from molecular cloning: a laboratory manual / Joseph Sambrook, David W. Russell.
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