Baird Parker Agar Base

Il digerito pancreatico di caseina, l'estratto di manzo e l'estratto di lievito forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. Il cloruro di litio, l'inibitore della tripsina e il tellurito di potassio inibiscono la flora di accompagnamento, mentre la glicina e il piruvato di sodio facilitano la crescita degli stafilococchi. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

La norma ISO 6888-1 raccomanda di aggiungere Egg Yolk Tellurite Emulsion Supplement (LC-5129) a Baird Parker Agar Base per ottenere il terreno completo Baird Parker Agar, usato per la conta generale degli stafilococchi coagulasi-positivi nei prodotti destinati all'alimentazione umana o animale, mediante la conta delle colonie ottenute su terreno solido. L'identità di Staphylococcus aureus isolato su Baird Parker Agar va confermata con la reazione della coagulasi.

La norma ISO 6888-2 raccomanda l'aggiunta di Rabbit Plasma Fibrinogen (RPF) Supplement (LC-6024) a Baird-Parker Agar Base per ottenere Rabbit Plasma Fibrinogen (RPF) Agar, usato per gli alimenti (come i formaggi a base di latte crudo e alcuni prodotti a base di carne cruda) che possono essere contaminati da Staphylococcus che formano colonie non caratteristiche su Baird-Parker Agar o da una flora di fondo che può mascherare le colonie ricercate. Questo terreno va usato subito dopo la preparazione.

Su Baird-Parker Agar le colonie caratteristiche sono nere o grigie, lucide e convesse e circondate da una zona chiara. Dopo 24 h di incubazione nella zona chiara può comparire un anello opalescente. Le colonie non caratteristiche possono essere nero brillante o grigie, con o senza un sottile bordo bianco, senza zona chiara né anello opalescente.

Su Rabbit Plasma Fibrinogen Agar le colonie di stafilococco sono piccole, nere o grigie, anche bianche, circondate da un alone di precipitazione che indica l'attività coagulasica. All'inizio dell'incubazione le colonie di Proteus possono presentare caratteristiche fisiche simili a quelle delle colonie di Staphylococcus aureus coagulasi-positivo. Tuttavia, dopo 24 o 48 ore di incubazione, possono assumere un colore bruno che si estende e invade la piastra, e che permette di distinguerle dagli stafilococchi.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 63 grammi di terreno in 1 litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 45-50 °C. Aggiungere in condizioni asettiche 5 mL di Tellurite Egg Yolk Emulsion (LC-5129) ogni 100 mL di terreno di base, oppure una fiala di RPF Supplement ISO (LC-6024) a 90 mL di terreno di base. Omogeneizzare delicatamente e distribuire in piastre di Petri.

Istruzioni per l'uso

Conta degli stafilococchi coagulasi-positivi con la tecnica che usa Baird-Parker Agar:

1. Inoculare 0,1 mL del campione liquido o 0,1 mL della sospensione iniziale. Inoculare anche la prima diluizione decimale.
2. Distribuire l'inoculo sulla superficie della piastra il più rapidamente possibile.
3. Incubare le piastre a una temperatura di 35-37 °C per 24 ± 2 ore, poi incubare di nuovo per altre 24 ± 2 ore alla stessa temperatura.
4. Esaminare le colonie caratteristiche a 24 ore e a 48 ore.
5. Selezionare un numero definito di colonie caratteristiche da confermare in provette di Brain Heart Infusion e incubare a 35-37 °C per 24 ± 12 h.
6. Aggiungere 0,1 mL della coltura ottenuta a 0,3 mL di plasma di coniglio e incubare a 35-37 °C.
7. Osservare la coagulazione del plasma dopo 4-6 ore. Se la prova è negativa, continuare l'incubazione per 24 ore.
8. La coagulazione di metà del volume del plasma è considerata un risultato positivo.

Conta degli stafilococchi coagulasi-positivi con la tecnica che usa Rabbit Plasma Fibrinogen Agar:

1. Inoculare 1 mL del campione liquido o 1 mL della sospensione iniziale con il metodo per inclusione. Inoculare anche la prima diluizione decimale.
2. Incubare le piastre a una temperatura di 35-37 °C per 18-24 ore. Se necessario, incubare di nuovo per altre 18-24 ore alla stessa temperatura.
3. Contare le colonie caratteristiche.

• Baird-Parker. J. App. Bact. 25:12. 1962.
• Baird-Parker. J. Ann. Microbiol. 30:409, 1963.
• Sharp, Neave and Reider. J. App. Bact. 28:390. 1962.
• Baird-Parker and Devenport J. App. Bact. 28:390. 1965.
• Tardio and Bact. J. AOAC. 54:728, 1971.