Enterococcus Selective Broth (Emterococcosel Broth)

I peptoni di caseina e di soia forniscono i nutrienti essenziali per la crescita. Il destrosio è il carboidrato fermentabile, fonte di energia. Il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico. Il citrato di sodio fornisce carbonio aggiuntivo. La sodio azide è un inibitore. Il solfito di sodio, quando è ridotto, produce H₂S. La L-cistina abbassa il potenziale di ossido-riduzione eliminando l'ossigeno, per mantenere un pH basso. Il cristal violetto è un indicatore di pH.

I campioni si inoculano in questo terreno selettivo e le provette si incubano a 35 °C per 18-24 ore in atmosfera normale. La crescita degli streptococchi si può riconoscere dalla formazione di un precipitato granulare sul fondo della provetta, con il liquido sovrastante limpido o leggermente torbido. A questo punto, eseguire una colorazione di Gram e riseminare per striscio su piastre di Trypticasein Soy Agar (LC-1068) con sangue o di Blood Agar Base (LC-1108), per determinare il tipo di emolisi e purificare la coltura.

La presenza di catene di lunghezza variabile di cocchi Gram-positivi inibiti dalla bacitracina a bassa concentrazione, catalasi negativi e insolubili nella bile o nei sali biliari, costituisce un'identificazione presuntiva valida degli streptococchi beta-emolitici del gruppo A. L'identificazione definitiva dei gruppi di streptococchi si può fare eseguendo altre prove biochimiche, come l'idrolisi dell'esculina, l'idrolisi del piruvato, ecc. Si può eseguire anche la tipizzazione sierologica, con i metodi degli antisieri di Lancefield o, in modo più pratico, con le tecniche di coagglutinazione di Edwards e Larson.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 30,6 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in provette da 10 mL con tappo a vite e sterilizzare in autoclave a 118 °C per 15 minuti. NON SURRISCALDARE, perché il terreno diventerebbe troppo inibitorio.

Istruzioni per l'uso

Per differenziare streptococchi e pneumococchi, porre dischi di bacitracina e di optochina nella zona dell'inoculo sulle piastre di Blood Agar e incubare per 18-24 ore a 35 ± 2 °C nelle condizioni raccomandate.

Eseguire la colorazione di Gram e le prove della catalasi e della solubilità nella bile sulle colonie caratteristiche prelevate dalla piastra di Blood Agar o dalla crescita ottenuta nel brodo.

• Washington, D.C. 2nd Ed., 1974
• Facklam and Carly, 1985, Manual of Clinical Microbiology, Lennette and others (Eds). 4th Ed. ASM, Washington DC.