Granada Agar Base

La produzione di un pigmento carotenoide arancione è una caratteristica esclusiva di Streptococcus agalactiae ed è alla base di diversi terreni usati per la sua rilevazione e identificazione.

Il proteoso peptone n. 3 fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'amido solubile nel terreno agisce come fattore di crescita, probabilmente come colloide protettore, e neutralizza i prodotti tossici che si formano durante lo sviluppo dei microrganismi. Favorisce anche la formazione del pigmento. Il destrosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. Il solfato di magnesio è uno ione magnesio necessario in una grande varietà di reazioni enzimatiche, compresa la replicazione del DNA. Il sale emisodico di MOPS e il fosfato disodico anidro agiscono come sistema tampone. Il cristal violetto inibisce i batteri Gram-positivi. L'agar batteriologico è l'agente solidificante. Il metotrexato, aggiunto alla miscela, agisce come potenziatore del pigmento. Il solfato di colistina e il metronidazolo inibiscono la flora indesiderata.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 78,2 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 100 °C per 7 minuti. Raffreddare a 50-55 °C e aggiungere 10 mL di una soluzione sterile (contenente 6 mg di metotrexato, 5 mg di solfato di colistina e 10 mg di metronidazolo in acqua sterile) e 50 mL di siero di cavallo sterile. Mescolare bene e versare in piastre di Petri o in provette.

Istruzioni per l'uso

Metodo per striscio su piastra:

1. In una piastra di Petri, aggiungere 12-15 mL di agar fuso e lasciar solidificare.
2. Inoculare 10 µL della sospensione iniziale e/o del campione diluito.
3. Distribuire l'inoculo sulla superficie dell'agar con un'ansa sterile.
4. Incubare le piastre capovolte alla temperatura di 35 ± 2 °C per 18-24 ore.

• De la Rosa M., Perez M., Carazo C., Pareja L., Peis J.I., Hernandez F., 1991. New Granada Medium Detection and Identification of Group B Streptococci. Journal of Clinical Microbiology. Apr 1992, p 1019-1021
• Schuchat, A. 1998. Epidemiology of group B streptococcal disease in the United States. Clin. Microbiol. Rev. 11: 497-513
• Islam, A.K.M. 1977. Rapid recognition of group B streptococci. Lancet I: 256-257.
• Pritzlaff, C.A., et al. 2001. Genetic basis for the beta-haemolytic/cytolytic activity of group B Streptococcus. Molec. Microbiol. 39: 236-247.