Novobiocin Selective Supplement (10 mg)

Tecnica

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Ricostituire la fiala con un diluente sterile in condizioni asettiche e aggiungerla a 500 mL di terreno base raffreddato a temperatura ambiente.

Non surriscaldare dopo l'aggiunta del supplemento.

Versare il terreno completo in contenitori adatti.

Inoculare e incubare secondo le norme e le specifiche.

L'isolamento presuntivo del microrganismo cercato va confermato con ulteriori prove.

Per l'arricchimento di E. coli O157 usare Tryptone Soya Broth

Secondo le istruzioni di ISO 16654:2001, la rilevazione di E. coli O157:H7 si svolge in quattro fasi successive:

• Arricchimento del campione in TSB + novobiocina.
• Separazione e concentrazione con tecniche immunomagnetiche.
• Isolamento su due agar diversi: il primo CT SMAC/MacConkey Sorbitol e il secondo scelto liberamente dall'utilizzatore.
• Conferma delle colonie presuntive di E. coli O157:H7 con prove biochimiche.

Ricostituire la fiala con acqua distillata sterile, preriscaldata a circa 37 °C, e aggiungerla a 500 mL di brodo base sterilizzato e raffreddato a temperatura ambiente.

Incubare le provette ben chiuse, in atmosfera aerobica, a 42 ± 2 °C per 24 h.

Seguire le istruzioni descritte nella norma ISO.

Ricostituire la fiala liofilizzata originale aggiungendo 6 mL di acqua distillata sterile.

Nota: ogni fiala è sufficiente per integrare 500 mL di terreno base: TSB Tryptone Soy Broth o Semisolid Rappaport-Vassiliadis Modified.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Ricostituire 1 fiala come indicato in Composizione; agitare e sciogliere completamente.

Aggiungere 1 fiala a 500 mL di terreno base. NON RISCALDARE dopo l'aggiunta del supplemento.

Distribuire in provette da 10 mL il terreno completo, raffreddato a 50 °C.

Incubare secondo le istruzioni per il terreno completo indicate in Composizione.

Anaerobiosi. Incubazione a 44 ± 1 °C per 21 ± 3 h.

Controllo di sterilità

Aggiungere 5 mL del campione a 100 mL di TSB e a 100 mL di Thioglycollate.

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

• ISO 16654:2001 Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of Escherichia coli O157.
• De Smedt, J.M. et al. (1991) Int. J. Food Micro. 13:301-308.