Terreni disidratati
Sellers Agar
Terreno differenziale per lo studio dei batteri Gram-negativi non fermentanti.
- Codice
- LC-1065
- Categoria
- Terreni disidratati
- Formato
- 500 g
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 15 mesi
Sellers Agar è un terreno molto utile per identificare e differenziare i bacilli Gram-negativi non fermentanti, come Pseudomonas aeruginosa e Alcaligenes faecalis. La differenziazione si basa sulla rilevazione della fluorescenza, dell'ossidazione del glucosio, della produzione di azoto gassoso e delle variazioni di pH, da campioni clinici e altri materiali.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Rilevazione e differenziazione dei batteri Gram-negativi non fermentanti.
Settori
Alimenti, acque.
Preparazione
43,4 g in un litro di acqua distillata; far bollire per un minuto, distribuire in provette e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 10 minuti.
Principio e uso
Il peptone di gelatina fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il solfato di magnesio è un cofattore di varie reazioni metaboliche. Il nitrito di sodio fornisce azoto ad alcuni microrganismi. La L-arginina fornisce aminoacidi per la crescita. Il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico. Il fosfato dipotassico agisce come sistema tampone. La fermentazione del D-mannitolo è rilevata dal blu di bromotimolo come un alone giallo intorno alle colonie. Il rosso fenolo è un indicatore di pH. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.
Acinetobacter calcoaceticus somiglia morfologicamente a Neisseria ed è spesso indicato erroneamente come causa di uretrite gonococcica e di meningite meningococcica (resistente alla penicillina). Per facilitare l'identificazione dei non fermentanti si dovrebbero usare altri terreni, come OF Basal Medium (LC-1500), Indole Nitrate Medium (LC-1504), ecc.
Alla luce UV mostrano fluorescenza solo le Pseudomonas, e la fluorescenza è stimolata dal magnesio e dal mannitolo del terreno. A volte è necessario tenere le provette per 2 giorni perché Pseudomonas produca nel terreno una tipica reazione alcalina (colore blu). Dopo l'incubazione, verificare l'ossidazione del glucosio dalla comparsa di una banda gialla, che può scomparire dopo 24 ore.
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Polvere fine |
| Colore del terreno disidratato | Beige |
| Colore del terreno preparato | Verde |
| pH finale (25 °C) | 6,7 ± 0,2 |
| Quantità per litro | 43,4 g |
| Conservazione | da 2 a 25 °C |
Formula
| Componente | g/L |
|---|---|
| Blu di bromotimolo | 0,04 |
| Agar batteriologico | 13,5 |
| Fosfato dipotassico | 1 |
| D-mannitolo | 2 |
| Peptone di gelatina | 20 |
| L-arginina | 1 |
| Solfato di magnesio | 1,5 |
| Rosso fenolo | 0,008 |
| Cloruro di sodio | 2 |
| Estratto di lievito | 1 |
| Nitrato di sodio | 1 |
| Nitrito di sodio | 0,35 |
Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.
Preparazione e uso
Preparazione
Sospendere 43,4 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in provette e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 10 minuti. Lasciar raffreddare in posizione inclinata, in modo da ottenere un fondo profondo 3,5 cm e un becco lungo 7-7,5 cm.
Importante: subito prima dell'inoculo, aggiungere 0,15 mL o 2 gocce di soluzione acquosa di destrosio al 50 %, lasciandola scorrere lungo la parete della provetta opposta al becco.
Istruzioni per l'uso
Inoculare il terreno con un ago, per infissione nel fondo della provetta e per striscio sul becco. Incubare a 35 ± 2 °C per 18-24 ore.
Controllo qualità
Prova microbiologica
Condizioni di incubazione: 35 ± 2 °C / 18-24 h.
| Microrganismo | Specifica | Reazione caratteristica |
|---|---|---|
| Acinetobacter calcoaceticusATCC 19638 | Crescita buona | Becco blu, fondo verde, banda gialla, fluorescenza (-) |
| Pseudomonas aeruginosaATCC 27853 | Crescita buona | Becco blu-verde, fondo blu-verde, banda blu, fluorescenza (+), gas/azoto (+) |
| Alcaligenes faecalisATCC 8750 | Crescita buona | Becco blu-verde, fondo blu-verde, fluorescenza (-), gas/azoto (+) |
Bibliografia
- Sellers. J. Bact. 87: 46. 1964.
- Lennette E.H., Spaulding H.E. and Truant P.J. Manual of Clinical Microbiology, 2nd Ed. 1974.
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