Differential Reinforced Clostridium Broth

L'estratto di manzo e il peptone di caseina forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B, essenziali per la crescita batterica. Il glucosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. La L-cisteina cloridrato è l'agente riducente. L'amido assorbe gli eventuali metaboliti tossici prodotti. Il citrato ferrico ammonico e il solfito di sodio sono indicatori di H₂S.

I Clostridium riducono il solfito a solfuro e il solfuro di ferro prodotto fa diventare nero il terreno di coltura. Poiché anche altri batteri possono produrre solfuro, le forme vegetative vanno prima eliminate dalla coltura con un trattamento adatto (per esempio la pastorizzazione), e poi vanno identificati i microrganismi anaerobi sporigeni. Per inibire la crescita della maggior parte dei microrganismi non sporigeni, aggiungere al brodo 70 UI/mL di polimixina.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 30,1 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Secondo ISO 6461-1

Per la rilevazione e la conta delle spore di anaerobi solfito-riduttori (clostridi) secondo ISO 6461-1 (UNE-EN 26461-1):

1. Scaldare il campione a bagnomaria a 75 ± 5 °C per 15 min.
2. Aggiungere 50 mL di campione a un flacone da 100 mL contenente 50 mL di terreno a doppia concentrazione.
3. Aggiungere 10 mL di campione a una serie di cinque flaconi da 25 mL contenenti 10 mL di terreno a doppia concentrazione.
4. Aggiungere 1 mL di campione a una serie di cinque flaconi da 25 mL contenenti 25 mL di terreno a concentrazione semplice.
5. Incubare i flaconi inoculati a 36 ± 1 °C per 44 ± 4 h.
6. I flaconi in cui si osserva un annerimento vanno considerati positivi.
7. Esprimere i risultati come numero più probabile di anaerobi solfito-riduttori (clostridi).

• GIBBS, B.M.: The detection of Clostridium welchii in the Differential Clostridial Medium technique. - J. Appl. Bact., 36; 23-33 (1973).
• HIRSCH, A., a. GRINSTED, E.: Methods for the growth and enumeration of anaerobic spore-formers from cheese, with observations on the effect on nisin. - J. Dairy Res., 21; 101-110 (1954).
• UNE-EN 26461-1 Detección y recuento de los esporos de microorganismos anaerobios sulfito-reductores (clostridia) Parte 1: Método por enriquecimiento en un medio líquido.