DNA Extraction Kit Complex

I campioni, contenuti in una microprovetta, sono sottoposti a lisi alcalina in assenza di agenti caotropici ma con una combinazione di resine che trattengono diverse molecole organiche e ioni, che potrebbero compromettere la qualità del DNA.

Nell'ultimo passaggio il campione viene risospeso con un tampone di correzione del pH, che contiene agenti neutralizzanti per i grandi inibitori della PCR (per esempio gli acidi umici) non catturati dalle resine.

Tabella 1. Esempi di campioni da trattare.

Contenuto

Il prodotto contiene 2 reagenti, sufficienti per estrarre il DNA da 100 campioni.

• R1: Lysis buffer, 25 mL
• R2: Inhibitor Neutralization and Adjustment Buffer, 75 mL

Attrezzatura aggiuntiva necessaria

• Pipetta a volume variabile 100-1000 µL.
• Puntali con filtro.
• Blocco termico con agitazione, 100-95 °C.
• Provette per microcentrifuga resistenti all'ebollizione.
• Portaprovette.
• Microcentrifuga.
• Vortex o agitatori per provette (almeno 1000 rpm).

Conservazione

Il kit viene spedito a temperatura ambiente e si può tenere senza refrigerazione fino al momento dell'apertura; una volta aperto, conservarlo in frigorifero (2-8 °C): resterà stabile fino a un anno.

Stato microbiologico

Prodotti sterili.

Preparazione dei reagenti

Il reagente è pronto all'uso.

Norme generali

Leggere attentamente le schede di dati di sicurezza di questo prodotto e di tutti i prodotti che si useranno durante la prova. I reagenti R1 e R2 hanno un pH estremo: non maneggiarli senza aver prima consultato la scheda di dati di sicurezza.

Questo prodotto è fabbricato e venduto per il controllo qualità di campioni alimentari/ambientali e non è stato progettato per nessun altro uso, in particolare per la diagnosi di malattie infettive. Il suo uso va affidato a personale esperto e qualificato nella manipolazione di prodotti chimici potenzialmente pericolosi.

Gli utenti devono decidere in modo indipendente sull'integrità delle informazioni, sulla base di tutte le fonti disponibili.

Operazioni da eseguire prima di iniziare

Tutti i flussi di lavoro della PCR devono essere eseguiti in condizioni che prevengano la contaminazione ambientale. Si raccomanda di includere in ogni serie almeno un bianco, per tenere sotto controllo i rischi di contaminazione.

• Togliere i reagenti R1 e R2 dal frigorifero.
• Accendere il blocco termico e impostare la temperatura a 80-90 °C.
• Mettere R1 sull'agitatore magnetico, a una velocità sufficiente a garantire una corretta omogeneizzazione.

Il protocollo parte da un pellet del campione, che può essere di natura diversa (vedi Tabella 1), ottenuto centrifugando ad almeno 10-13.000 g per 5-10 minuti.

Protocollo

1. Aggiungere 0,2 mL di R1.
2. Agitare alla massima velocità (minimo 1000 rpm) per 5 min.
3. Incubare a 80-90 °C in agitazione per 10 minuti. Se non si dispone di un blocco termico con agitazione, omogeneizzare 2-3 volte con il vortex durante il trattamento termico.
4. Togliere le provette e dispensare 0,6 mL di R2.
5. Agitare alla massima velocità (minimo 1000 rpm) per 1-2 min.
6. Centrifugare a 10-13.000 g per 1-2 minuti.

Il surnatante si può usare subito in una PCR. Se è necessario conservare il DNA, trasferire 0,3 mL in una nuova provetta e conservarlo ad almeno -20 °C.

Nota: se si intende misurare la quantità e la purezza del DNA con metodi spettrofotometrici, ricordare che il bianco dello strumento non si può fare con acqua o tampone TE: va fatto con una soluzione a base dei reagenti usati (1 vol. di R1 + 3 vol. di R2), altrimenti si sovrastimano la quantità di DNA e le sue impurità.

L'uso di questo prodotto non è destinato a scopi terapeutici né all'uso domestico, agricolo o cosmetico. Deve essere usato sotto la supervisione di una persona tecnicamente qualificata ed esperta nella manipolazione di prodotti chimici potenzialmente pericolosi.