E. coli-Coliforms Chromogenic Medium

L'interazione degli ingredienti del terreno, come peptone, sorbitolo e piruvato, assicura una crescita rapida delle colonie, compresi i coliformi infettivi, e permette anche il recupero dei coliformi con danno termico subletale. Tergitol-7 inibisce i batteri Gram-positivi e alcuni Gram-negativi senza influire sui batteri coliformi. Il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico e i sali di fosfato agiscono da sistema tampone. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

La rilevazione della beta-glucuronidasi è molto usata per differenziare Escherichia coli, perché l'enzima è presente in E. coli ma non negli altri membri del gruppo dei coliformi. La miscela cromogenica contiene i substrati cromogenici Salmon-GAL e X-glucuronide. Gli enzimi prodotti dai coliformi, beta-D-galattosidasi e beta-D-glucuronidasi, scindono questi substrati e danno alle colonie batteriche colorazioni diverse. La beta-D-galattosidasi scinde il substrato Salmon-GAL e dà alle colonie di coliformi un colore rosso salmone. La beta-D-glucuronidasi, enzima caratteristico di E. coli, scinde l'X-glucuronide e dà a queste colonie un colore blu. E. coli possiede i due enzimi e scinde entrambe le sostanze cromogeniche, dando colonie da blu scuro a viola. I coliformi totali sono la somma delle colonie di E. coli e delle colonie rosso salmone. L'aggiunta di triptofano al terreno permette di eseguire la prova dell'indolo per un'ulteriore conferma di E. coli.

Nota: alcuni ceppi di Shigella contengono l'enzima beta-D-glucuronidasi e possono crescere come colonie azzurre. Le colonie di E. coli negative alla beta-glucuronidasi sono color salmone, per esempio E. coli O157:H7.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 26,4 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. EVITARE DI SURRISCALDARE. NON STERILIZZARE IN AUTOCLAVE. Lasciar raffreddare a 45-50 °C e distribuire in piastre di Petri.

Istruzioni per l'uso

Tecnica per inclusione:

1. Depositare 1 mL della sospensione iniziale e/o del campione diluito in una piastra di Petri vuota.
2. Aggiungere in ogni piastra di Petri 12-15 mL di agar raffreddato a 44-47 °C.
3. Capovolgere le piastre e incubare a 35 ± 2 °C per 18-24 ore.

Tecnica di semina in superficie:

1. Inoculare 0,1 mL della sospensione iniziale e/o del campione diluito.
2. Distribuire l'inoculo sulla superficie della piastra di agar.
3. Capovolgere le piastre e incubare a 35 ± 2 °C per 18-24 ore.

Tecnica di filtrazione su membrana:

1. Filtrare un volume adeguato di campione attraverso la membrana.
2. Porre la membrana sulla superficie di una piastra di agar, evitando la formazione di bolle d'aria.
3. Capovolgere le piastre e incubare a 35 ± 2 °C per 18-24 ore.

• Alonso, J.L. Soriano, K., Amoros I., Ferrus, M.A. 1998 Quantitative determination of E. coli and fecal coliforms in water using a chromogenic medium. J. Environ. Sci Health 33.