Chromogenic Cronobacter Isolation Agar (CCI) ISO

La norma ISO 22964:2016 descrive un metodo orizzontale per la rilevazione di Cronobacter spp. e raccomanda questo terreno per l'isolamento di Cronobacter spp.

Il triptone fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B, essenziali per la crescita batterica. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. Il desossicolato di sodio inibisce la flora Gram-positiva di accompagnamento. Il tiosolfato di sodio aumenta la selettività e il recupero delle specie di Cronobacter e di Enterobacter. Il 5-bromo-4-cloro-3-indolil-alpha-D-glucopiranoside è il substrato cromogenico.

Cronobacter (in passato Enterobacter sakazakii) è oggi considerato un patogeno emergente, responsabile di gravi meningiti e di enterocolite necrotizzante nei lattanti non svezzati, che possono causare un tasso di mortalità del 40-80 %.

La patogenicità di Cronobacter per i lattanti non svezzati rende necessario rivedere il processo di produzione dei prodotti a base di latte destinati ai lattanti, garantendo l'assenza dei batteri nel prodotto finito.

Altre misure di prevenzione in ospedale comprendono l'igiene sanitaria degli alimenti preparati e la riduzione del tempo tra la preparazione e la somministrazione, per impedire la moltiplicazione dei microrganismi.

Preparazione

Sospendere 32,4 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 50 °C, omogeneizzare delicatamente e distribuire in piastre di Petri in quantità di 15 mL.

Secondo ISO 22964

1. Pre-arricchire la porzione da analizzare in un terreno non selettivo come Buffered Peptone Water BPW (LC-1402).
2. Incubare a una temperatura di 34-38 °C per 18 ± 2 h.
3. Inoculare la coltura ottenuta in BPW in un terreno di arricchimento selettivo: Selective Broth for Cronobacter (CSB) (LC-2143).
4. Incubare a una temperatura di 41,5 ± 1 °C per 24 ± 2 h.
5. Seminare e identificare le colonie su Chromogenic Cronobacter Isolation Agar (CCI).
6. Incubare a una temperatura di 41,5 ± 1 °C per 24 ± 2 h.
7. Per la conferma, le colonie tipiche si prelevano dall'agar cromogenico, si purificano su un agar non selettivo come TSA (LC-1068) e si caratterizzano biochimicamente.

• ISO 22964:2016 Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
• GUILLAUME-Gentil, O., Sonnard, V. Kandahai, M.C., Mauragg, J.D. and Jootsen, H. A simple and Rapid Cultural Method for Detection of Enterobacter sakazakii in environmental samples. Journal of Food Protection, 68 (1), 2005, pp. 64-69.