Cronobacter Selective Broth (CSB) ISO

Il digerito enzimatico di tessuti animali e l'estratto di carne forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. Il saccarosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. Il porpora di bromocresolo è un indicatore di pH.

Cronobacter (in passato Enterobacter sakazakii) è oggi considerato un patogeno emergente, responsabile di gravi meningiti e di enterocolite necrotizzante nei lattanti non svezzati, che possono causare un tasso di mortalità del 40-80 %.

La patogenicità di Cronobacter per i lattanti non svezzati rende necessario rivedere il processo di produzione dei prodotti a base di latte destinati ai lattanti, garantendo l'assenza dei batteri nel prodotto finito. Altre misure di prevenzione in ospedale comprendono l'igiene sanitaria degli alimenti preparati e la riduzione del tempo tra la preparazione e la somministrazione, per impedire la moltiplicazione dei microrganismi.

La norma ISO 22964 FDIS:2016 descrive un metodo orizzontale per la rilevazione di Cronobacter spp. e raccomanda questo terreno per l'arricchimento di Cronobacter spp. negli alimenti, nei mangimi e nei campioni ambientali. Una colorazione giallo/arancio del brodo dopo l'incubazione (dovuta alla fermentazione del saccarosio) indica la presunta presenza di Cronobacter. Se dopo l'incubazione il brodo è ancora di colore porpora, il campione si presume negativo per Cronobacter.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 28,04 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 50 °C e aggiungere in condizioni asettiche 2 fiale di Vancomycin Supplement (LC-6072), in modo da ottenere una concentrazione finale di vancomicina di 10 mg per litro di CSB. Omogeneizzare delicatamente e distribuire in provette in quantità di 10 mL.

Secondo ISO 22964

Per la rilevazione di Cronobacter spp. secondo ISO 22964:

1. Preparare la porzione da analizzare aggiungendo 10 g o 10 mL del campione a 90 mL di terreno di pre-arricchimento BPW.
2. Incubare a 34-38 °C per 18 ± 2 ore.
3. Trasferire 0,1 mL della coltura ottenuta in 10 mL di CSB e mescolare bene.
4. Incubare a 41,5 ± 1 °C per 24 ± 2 ore.
5. Con la coltura di arricchimento ottenuta prima, inoculare la superficie di CCI Agar (LC-1446) e incubare a 41,5 ± 1 °C per 24 ± 2 ore.
6. Conferma.

• ISO 22964:2016 Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
• GUILLAUME-Gentil, O., Sonnard, V. Kandahai, M.C., Mauragg, J.D. and Jootsen, H. A simple and Rapid Cultural Method for Detection of Enterobacter sakazakii in environmental samples. Journal of Food Protection, 68 (1), 2005, pp. 64-69.