L-Ornithine Decarboxylation Medium ISO

La norma ISO 22964 descrive un metodo orizzontale per la rilevazione di Cronobacter spp. e raccomanda questo terreno per la conferma biochimica di Cronobacter spp.

Cronobacter (in passato Enterobacter sakazakii) è oggi considerato un patogeno emergente, responsabile di gravi meningiti e di enterocolite necrotizzante nei lattanti non svezzati, che possono causare un tasso di mortalità del 40-80 %. La patogenicità di Cronobacter per i lattanti non svezzati rende necessario rivedere il processo di produzione dei prodotti a base di latte destinati ai lattanti, garantendo l'assenza dei batteri nel prodotto finito.

Altre misure di prevenzione in ospedale comprendono l'igiene sanitaria degli alimenti preparati e la riduzione del tempo tra la preparazione e la somministrazione, per impedire la moltiplicazione dei microrganismi.

L'estratto di lievito fornisce azoto, minerali, aminoacidi e vitamine essenziali per la crescita, in particolare del gruppo B. Il glucosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. La L-ornitina si aggiunge per verificare la presenza dell'enzima ornitina decarbossilasi. Se i microrganismi possiedono questo enzima, l'enzima si attiva nell'ambiente acido creato dalla fermentazione iniziale del glucosio. Una volta decarbossilato l'aminoacido, si produce la diammina putrescina. Il risultato è un'alcalinizzazione del terreno, che lo fa diventare porpora o violetto. I microrganismi privi dell'enzima restano acidi a causa della fermentazione, e il terreno diventa di colore giallo. Il porpora di bromocresolo è un indicatore di pH che indica l'attività della decarbossilasi.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 14,0 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in provette e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Istruzioni per l'uso

1. Pre-arricchire la porzione da analizzare in un terreno non selettivo, Buffered Peptone Water BPW (LC-1402).
2. Inoculare la coltura ottenuta in BPW nel terreno di arricchimento selettivo Cronobacter Selective Broth (CSB) (LC-2143).
3. Seminare e identificare le colonie su Chromogenic Cronobacter Isolation Agar (CCI) (LC-1446).
4. Per la conferma, le colonie tipiche si prelevano dall'agar cromogenico, si purificano su un agar non selettivo come TSA (LC-1068) e si caratterizzano biochimicamente.
5. Inoculare L-Ornithine Decarboxylation Medium con ciascuna delle colonie selezionate, per osservare la decarbossilazione della L-ornitina.

• ISO 22964 Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
• GUILLAUME-Gentil, O., Sonnard, V. Kandahai, M.C., Mauragg, J.D. and Jootsen, H. A simple and Rapid Cultural Method for Detection of Enterobacter sakazakii in environmental samples. Journal of Food Protection, 68 (1), 2005, pp. 64-69.