Campylobacter Preston Broth Base ISO

I campylobacter termotolleranti hanno acquisito una grande importanza per la salute pubblica, soprattutto come agenti di malattie diarroiche nell'uomo. Le specie termotolleranti più frequenti e rilevanti per la salute umana sono Campylobacter jejuni e Campylobacter coli.

Il digerito enzimatico di tessuti animali e di caseina e il peptone forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. La polimixina B è attiva solo contro i batteri Gram-negativi e le specie di Proteus sono talvolta resistenti. Il trimetoprim di solito inibisce le specie di Proteus e altri batteri Gram-negativi. Anche la rifampicina è attiva contro i microrganismi Gram-negativi. L'amfotericina B sopprime la crescita di lieviti e funghi. L'aumento della temperatura ha mostrato un aumento della selettività.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 25 grammi di terreno in 940 mL di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 47 °C e aggiungere in condizioni asettiche due fiale di Preston Campylobacter Supplement (LC-6081), insieme a una soluzione preparata in precedenza e sterilizzata per filtrazione, contenente 0,25 g di piruvato di sodio, 0,25 g di metabisolfito di sodio e 0,25 g di solfato di ferro(II) idrato, sciolti in 5 mL di acqua. Aggiungere poi 50 mL di sangue di cavallo lisato sterile. Omogeneizzare delicatamente e distribuire in contenitori adatti.

Secondo ISO 10272

Per la rilevazione e la conta di Campylobacter spp. nei campioni con bassi numeri di campylobacter e alto livello di microflora di fondo, secondo ISO 10272:

1. Aggiungere la porzione da analizzare al terreno di arricchimento liquido Preston Broth. In generale, per preparare la sospensione iniziale, unire una quantità di 10 g o 10 mL della porzione da analizzare a 90 mL di Preston Broth.
2. Incubare in atmosfera microaerobica a 41,5 °C per 24 ± 2 h.
3. Con la coltura di arricchimento ottenuta, inoculare il terreno selettivo CCDA Agar (LC-1129).
4. Incubare il terreno selettivo solido a 41,5 °C in atmosfera microaerobica per 44 h, per rilevare la presenza di colonie sospette di Campylobacter.
5. Esaminare al microscopio la morfologia e la motilità delle colonie sospette di Campylobacter, trapiantarle su un agar al sangue non selettivo e poi confermarle con la rilevazione dell'attività ossidasica e con una prova di crescita in aerobiosi a 25 °C.

• ISO 10272:2017 Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection and enumeration of Campylobacter spp. Part 1: Detection method.