Lactose Glucuronide m-Agar (mlGA)

Il peptone e il proteoso peptone forniscono azoto, aminoacidi e minerali. L'estratto di lievito è una fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il lattosio è la fonte di carbonio ed energia e, quando è fermentato, l'indicatore di pH rosso fenolo fa comparire colonie gialle per la produzione di acido. Il piruvato di sodio protegge le cellule danneggiate per favorire la crescita dei coliformi. Il lauril solfato di sodio è l'agente selettivo che inibisce i microrganismi Gram-positivi. E. coli assorbe l'agente cromogeno X-beta-D-glucuronide e l'attività dell'enzima glucuronidasi intracellulare rompe il legame tra il cromoforo e il glucuronide. Il cromoforo liberato è colorato e si accumula all'interno delle cellule, colorando di verde le colonie di E. coli, in combinazione con la fermentazione del lattosio. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

In sintesi, l'identificazione di Escherichia coli e dei coliformi è facilitata da due reazioni biochimiche nel terreno: la fermentazione del lattosio è rilevata dal colorante rosso fenolo, che dà colonie gialle quando si produce acido. Il substrato cromogeno X-glucuronide è scisso dall'enzima glucuronidasi e produce un cromoforo blu che si accumula nelle cellule batteriche. I coliformi sono lattosio-positivi, quindi le colonie saranno gialle; Escherichia coli è lattosio-positivo e possiede la glucuronidasi, quindi le sue colonie saranno verdi.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 88 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti e distribuire in piastre di Petri.

Istruzioni per l'uso

Metodo di filtrazione su membrana:

1. Filtrare il campione d'acqua su un filtro a membrana (diametro 47 nm, porosità 0,45 µm).
2. Il volume e la diluizione dell'acqua filtrata vanno scelti in modo che il numero di colonie da contare sulla membrana sia 20-80.
3. Posare il filtro a membrana su Lactose Glucuronide m-Agar (MLGA), facendo attenzione che sotto la membrana non restino bolle d'aria.
4. Incubare le piastre a 30 °C per 4 ore, poi a 37 °C per 14 ore.

• Mara, D. D. 1973. A single medium for the rapid detection of Escherichia coli at 44 °C. J. Hyg. 71:783-785.
• Pugsley, A. P., L. J. Evision, and A. James. 1973. A simple technique for the differentiation of Escherichia coli in water examination. Water Res. 7:1431-1437.
• The Environment Agency - Methods for Examination of Waters and Associated Material - The Microbiology of Drinking Water 2002.