GC Broth

La miscela di peptoni fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'amido di mais assorbe gli eventuali metaboliti tossici prodotti. I fosfati dipotassico e monopotassico agiscono come sistemi tampone. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico.

GC Agar Base si usa, con l'aggiunta di emoglobina e supplementi, per la preparazione di Chocolate Agar e di Thayer-Martin Medium. Chocolate Agar si prepara con l'aggiunta del 2 % di emoglobina. L'aggiunta di emoglobina fornisce l'emina (fattore X), necessaria alle specie di Haemophilus, e favorisce la crescita delle specie di Neisseria.

Per la crescita di Haemophilus e Neisseria spp. è necessario anche un arricchimento chimico composto da cofattori, vitamine e nicotinammide adenina dinucleotide (NAD). Se necessario, si aggiungono supplementi antimicrobici come inibitori, per una migliore selettività del terreno.

Thayer-Martin Medium è raccomandato per l'isolamento primario di N. gonorrhoeae e N. meningitidis da campioni con altri batteri. È studiato per ridurre la sovracrescita dei contaminanti su gonococchi e meningococchi, per sopprimere la crescita delle specie saprofite di Neisseria e per favorire la crescita delle Neisseria patogene. Le colonie tipiche di N. gonorrhoeae su Thayer-Martin Medium sono bianco-grigie, opache, a volte lucide, di aspetto finemente granulare, di dimensioni variabili (1-2 mm), rotonde con margini interi o lobati e mucose dopo 48 ore di incubazione.

Il campione va posto sulla superficie della piastra, assicurandosi che un inoculo abbondante sia contenuto in un'area relativamente piccola. Strisciando a partire da quest'area si ottengono colonie ben isolate. Incubare in atmosfera umida con il 5-10 % di CO₂ e a 35 °C per 40-48 ore. Sulle colonie isolate sospette eseguire una colorazione di Gram e la prova dell'ossidasi.

Negli studi sui carboidrati con CTA Medium (LC-1502) addizionato di zuccheri selezionati all'1 %, N. gonorrhoeae fermenta solo il glucosio, con produzione di acido ma senza produzione di gas. N. meningitidis fermenta sia il glucosio sia il maltosio, con acido ma senza produzione di gas. Le prove sui carboidrati si eseguono incubando il terreno per 1-4 giorni a 35 °C, in aerobiosi e senza CO₂.

Gli agenti antimicrobici delle formule selettive come Thayer-Martin Medium inibiscono alcuni ceppi di N. gonorrhoeae, perciò è opportuno seminare per striscio piastre di Chocolate Agar non selettivo per coltivare questi microrganismi.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 26 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Per preparare GC Agar Base, aggiungere 10 g di agar al brodo prima di sterilizzarlo. Sterilizzare in autoclave anche 250 mL di una soluzione di emoglobina al 2 %, preparata aggiungendo gradualmente acqua a 5 grammi di emoglobina secca fino a ottenere una sospensione uniforme, prima di esporla al calore dell'autoclave. Raffreddare le due beute a 50 °C, aggiungere in condizioni asettiche la soluzione di emoglobina a GC Agar Base e mescolare delicatamente. Aggiungere in condizioni asettiche Polyenrichment Supplement (LC-6011), 1 fiala A ricostituita con 1 fiala B, per 250 mL di terreno + 250 mL di soluzione sterile di emoglobina al 2 %. Mescolare con cura per evitare la formazione di bolle. Versare in piastre o in provette con tappo a vite. Lasciar solidificare le provette con un becco lungo.

GC Agar Base si può preparare anche aggiungendo i seguenti supplementi:

1. VCN Supplement (LC-6013). Questo supplemento trasforma il terreno in Thayer-Martin Medium.
2. VCAT Supplement (LC-6014). Questo supplemento si usa per l'isolamento di Neisseria.
3. VCNT Supplement (LC-6026). Anche questo supplemento si usa per l'isolamento di Neisseria.
4. LCAT Supplement (LC-6012). Questo supplemento si usa per l'isolamento delle Neisseria patogene. Va aggiunto dopo l'aggiunta di sangue di cavallo lisato, al posto dell'emoglobina e di Polyenrichment Supplement.

Nota: VCAT Supplement e VCNT Supplement contengono antibiotici diversi (uno ciascuno) e concentrazioni diverse degli stessi antibiotici (tre), presenti in entrambi. La scelta va fatta secondo la selettività richiesta.

Quando si aggiungono VCN Supplement, VCAT Supplement e VCNT Supplement, si devono usare Polyenrichment Supplement e la soluzione di emoglobina al 2 %.

Istruzioni per l'uso

Per i risultati consultare i riferimenti e le procedure appropriati.

Incubare alla temperatura di 35 ± 2 °C per 40-48 ore.

• Bailey and Scott. Diagnostic Microbiology. Fifth Edition, 1978. The C.V. Mosby Company. St. Louis, USA.
• Preparation of Transgrow. Sept. 15. 1971. Venereal Disease Research Lab., C.D.C. Atlanta, Ga., USA.
• Thayer, J. D. Martin J. E., 1966. Improved medium selective for the cultivation of N. gonorrhoeae and N. meningitidis. Public Health Rep. 81. 559-562.