Giolitti-Cantoni Broth (Double Concentration) ISO

Descrizione

La crescita degli stafilococchi è favorita dal piruvato, dalla glicina e soprattutto da un'alta concentrazione di mannitolo. L'aggiunta di polisorbato 80 è necessaria per un buon recupero di Staphylococcus aureus (Chopin et al., 1985). La flora accompagnatrice è inibita dal cloruro di litio e dal tellurito di potassio.

Le condizioni di crescita anaerobiche aumentano la selettività del terreno. In genere la crescita degli stafilococchi si riconosce da un annerimento o da precipitati neri nel terreno di coltura, dovuti alla riduzione del tellurito a tellurio metallico.

Tecnica

Fare riferimento al protocollo standard per i prodotti specifici (alimenti e mangimi EN-ISO 6888-3:2003; latte e prodotti a base di latte ISO 5944:2001 e FIL-IDF 60:2001). Come tecnica generale si suggerisce la seguente:

Usare macerati dell'alimento o una serie di diluizioni in base 10 e inoculare 1 mL nel terreno a concentrazione singola. Per abbassare il limite di rilevazione, si possono inoculare 10 mL del campione in esame (prodotti liquidi) o della prima diluizione (altri prodotti) nel terreno a doppia concentrazione. Le procedure MPN richiedono almeno tre provette per almeno tre livelli di diluizione. Se non è disponibile una giara per anaerobiosi, ricoprire con uno strato di vaselina sterilizzata o di vaspar. Incubare in anaerobiosi per 24-48 ore a 37 °C.

Dopo 24 ore, trapiantare per striscio su Baird-Parker Agar le provette che mostrano annerimento o precipitato nero. Incubare le altre provette per altre 24 ore e trapiantare su Baird-Parker Agar tutte le provette che mostrano crescita (indipendentemente dall'annerimento).

Nella determinazione della carica batterica con il metodo MPN, tutte le provette che mostrano crescita si considerano presunte positive per gli stafilococchi e sono confermate solo se danno un risultato positivo nella prova della coagulasi.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ (selettività).

Diluire alla concentrazione normale.

Aerobiosi. Incubazione a 37 ± 1 °C, lettura dopo 24/44 ± 4 h.

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• CHOPIN, A. et al. (1985) ICMSF Methods Studies XV. Comparison of four media and methods for enumerating Staphylococcus aureus in powdered milk. J. Food Protect. 48:21-27.
• EN-ISO 6888-3 Standard (2003) Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of coagulase positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species). Part 3: Detection and MPN technique for low numbers.
• EN-ISO 6888-3/AC Standard (2005) Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of coagulase positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species). Part 3: Detection and MPN technique for low numbers.
• FIL-IDF (2001) Milk and milk based Products. Detection of coagulase-positive staphylococci. MPN technique. Standard 60:2001. Brussels.
• GIOLITTI, G. A. CANTONI, C. (1966) A medium for the isolation of staphylococci from foodstuffs. J. Appl. Bact. 29, 395-398.
• HARRIGAN, WF. & McCANCE, M.E. (1976) Laboratory Methods in Food and Dairy Microbiology. Academic Press. London.
• ISO 5944 Standard (2001) Milk and milk based Products. Detection of coagulase-positive staphylococci. MPN technique.
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.