Iron Sulfite Agar ISO

Il digerito enzimatico di caseina e il peptone di soia forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B, essenziali per la crescita batterica. Il citrato ferrico e il disolfito di sodio sono indicatori di H₂S: Clostridium perfringens riduce il solfito a solfuro, che a sua volta reagisce con il ferro e forma un precipitato nero di solfuro di ferro, visibile come colonie nere. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 40 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto o fino a completa dissoluzione. Distribuire in beute e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Secondo ISO 15213

Conta dei batteri solfito-riduttori che crescono in condizioni anaerobiche secondo ISO 15213:

1. Prendere piastre o provette per preparare il terreno Iron Sulfite.
2. Se si usano piastre, trasferire in ogni piastra 1 mL della prima diluizione decimale (10⁻¹) del campione in esame se il prodotto è liquido, oppure 1 mL della prima diluizione decimale della sospensione iniziale (10⁻²) nel caso di altri prodotti.
3. Versare in ogni piastra di Petri circa 15 mL di Iron Sulfite Agar.
4. Mescolare con cura e lasciar solidificare il terreno.
5. Dopo che il terreno si è solidificato, versare nella piastra da 5 mL a 10 mL dello stesso terreno come strato superiore.
6. Se si usano provette, inoculare 1 mL di ogni diluizione in ciascuna di due provette di terreno.
7. Mescolare delicatamente e lasciar solidificare il terreno.
8. Dopo che il terreno si è solidificato, versare in ogni provetta da 2 a 3 mL dello stesso terreno come strato superiore.
9. Incubare le piastre o le provette in giare per anaerobiosi a 37 ± 1 °C per 24-48 ore.
10. Se si sospettano batteri termofili, incubare a 50 ± 1 °C.

Secondo ISO 6461

Rilevazione e conta delle spore degli anaerobi solfito-riduttori (clostridi) con il metodo di filtrazione su membrana secondo ISO 6461:

1. Scaldare il campione per un tempo sufficiente a distruggere i batteri vegetativi (75 ± 5 °C per 15 minuti).
2. Filtrare il campione di acqua attraverso una membrana filtrante.
3. Porre il filtro su Iron Sulfite Agar.
4. Incubare a 37 ± 1 °C per 20 ± 4 ore e 44 ± 4 ore in condizioni anaerobiche.
5. Contare tutte le colonie nere.

• ISO 15213. Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of sulfite-reducing bacteria growing under anaerobic conditions.