DNA polimerasi
Pfu proofreading Polymerase
DNA polimerasi proofreading da Pyrococcus furiosus per PCR ad alta fedeltà e clonaggio blunt-end
- Codice
- M3004
- Categoria
- DNA polimerasi
- Formati
- 3 formati
- Produttore
DNA polimerasi termostabile ricombinante, derivata dall'archeo ipertermofilo Pyrococcus furiosus ed espressa in E. coli, con attività polimerasica 5'-3' ed esonucleasica 3'-5' di correzione delle bozze. Rispetto alla Taq offre un'accuratezza circa dieci volte maggiore e genera prodotti con estremità piatte, ideali per clonaggio ed espressione. Viene fornita a 2,5 U/µL con tampone di reazione 10x contenente MgSO4.
Caratteristiche principali
Correzione delle bozze
L'esonucleasi 3'-5' rimuove i nucleotidi incorporati in modo errato, per un'accuratezza circa dieci volte superiore alla Taq.
Prodotti a estremità piatte
Senza aggiunta di A al 3' e senza attività esonucleasica 5'-3': adatti al clonaggio blunt-end.
Termostabile e processiva
Emivita ad alta temperatura nettamente superiore a quella della Taq.
Compatibile con nucleotidi modificati
Accetta dNTP, ddNTP e dNTP o ddNTP fluorescenti.
Applicazioni
- PCR ad alta fedeltà
- Clonaggio blunt-end
- Amplificazione di sequenze per espressione
- Reazioni di estensione del primer
- Applicazioni che richiedono un basso tasso di errore
Specifiche tecniche
| Concentrazione | 2,5 U/µL |
|---|---|
| Fornito con | Tampone di PCR 10x con MgSO4: 60 mM (NH4)2SO4, 200 mM Tris-HCl pH 8,8, 100 mM KCl, 20 mM MgSO4, 1% Triton X-100, 1% BSA |
| Attività | Polimerasi 5'-3' ed esonucleasi 3'-5'; nessuna attività esonucleasica 5'-3' |
| Fedeltà | Circa 10 volte superiore alla Taq |
| Estremità dei prodotti | Piatte; per il clonaggio TA serve una fase di aggiunta di A |
| Estensione consigliata | Circa 1 minuto ogni 250 bp di bersaglio, circa il doppio rispetto alla Taq |
| Lunghezza dell'amplicone | Frammenti fino a circa 4 kb; oltre 5 kb serve in genere un'ottimizzazione |
| Definizione di unità | 1 U incorpora 10 nmol di dNTP in materiale insolubile in acido in 30 minuti a 72 °C |
| Conservazione | -20 °C; fino a 3 mesi a +2/+8 °C |
| Spedizione | Su ghiaccio; piena attività per almeno 2 settimane a +15/+30 °C |
| Stabilità | Fino alla data di scadenza riportata in etichetta, se conservata a -20 °C |
| Controllo qualità | Efficienza e riproducibilità di amplificazione; assenza di attività eso ed endonucleasiche, RNasi e proteasi; test di self-priming su DNA genomico umano |
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