DNA polimerasi
Pwo proofreading Polymerase
DNA polimerasi termostabile con attività proofreading 3'-5' per PCR ad alta fedeltà con estremità piatte
- Codice
- M3002
- Categoria
- DNA polimerasi
- Formati
- 3 formati
- Produttore
Polimerasi ricombinante derivata dall'archeo ipertermofilo Pyrococcus woesei ed espressa in E. coli, dotata di attività polimerasica 5'-3' e di attività esonucleasica 3'-5' di correzione delle bozze. L'accuratezza è circa dieci volte superiore a quella della Taq e i prodotti di PCR hanno estremità piatte, adatti al clonaggio blunt-end e all'espressione. Viene fornita a 2,5 U/µL insieme al tampone di reazione 10x con MgSO4.
Caratteristiche principali
Alta fedeltà
L'attività esonucleasica 3'-5' corregge gli errori di incorporazione, con un'accuratezza circa dieci volte superiore alla Taq.
Estremità piatte
Nessuna aggiunta di A al 3' e nessuna attività esonucleasica 5'-3': prodotti pronti per il clonaggio blunt-end.
Elevata termostabilità
Emivita ad alta temperatura nettamente più lunga di quella della Taq.
Accetta nucleotidi modificati
Incorpora dNTP, ddNTP e dNTP o ddNTP fluorescenti.
Applicazioni
- PCR ad alta fedeltà
- Clonaggio di prodotti di PCR con estremità piatte
- Amplificazione per clonaggio ed espressione
- Reazioni di estensione del primer
- Applicazioni che richiedono un basso tasso di errore
Specifiche tecniche
| Concentrazione | 2,5 U/µL |
|---|---|
| Fornito con | Tampone di PCR 10x con MgSO4: 60 mM (NH4)2SO4, 200 mM Tris-HCl pH 8,8, 100 mM KCl, 20 mM MgSO4, 1% Triton X-100, 1% BSA |
| Attività | Polimerasi 5'-3' ed esonucleasi 3'-5'; nessuna attività esonucleasica 5'-3' |
| Fedeltà | Circa 10 volte superiore alla Taq |
| Estremità dei prodotti | Piatte; per il clonaggio TA serve una fase di aggiunta di A |
| Estensione consigliata | Circa 1 minuto ogni 250 bp di bersaglio, più lunga rispetto alla Taq |
| Lunghezza dell'amplicone | Fino a circa 4 kb; oltre 5 kb serve in genere un'ottimizzazione |
| Definizione di unità | 1 U incorpora 10 nmol di dNTP in materiale insolubile in acido in 30 minuti a 72 °C |
| Conservazione | -20 °C; fino a 3 mesi a +2/+8 °C |
| Spedizione | Su ghiaccio; piena attività per almeno 2 settimane a +15/+30 °C |
| Stabilità | Fino alla data di scadenza riportata in etichetta, se conservata a -20 °C |
| Controllo qualità | Efficienza e riproducibilità di amplificazione; assenza di attività eso ed endonucleasiche, RNasi e proteasi; test di self-priming su DNA genomico umano |
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