Terreni pronti all'uso
R2A Agar. Irradiated EP/USP
Terreno solido per la conta dei microrganismi eterotrofi nelle acque trattate, secondo il metodo delle farmacopee.
- Codice
- LC-792
- Categoria
- Terreni pronti all'uso
- Formato
- 20 piastre da 90 mm
- Conservazione
- da 15 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 2 mesi
- Norme
- Farmacopea Europea
R2A Agar fu proposto nel 1979 da Reasoner e Geldreich e qualche anno dopo fu accettato dall'APHA come terreno alternativo per la conta delle cellule stressate nell'acqua potabile trattata. Il terreno di coltura è stato adottato anche dalla Farmacopea Europea per il controllo dell'acqua purificata.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Conta non selettiva dei mesofili aerobi.
Settori
Clinico, controllo qualità del prodotto finito, farmaceutico e veterinario.
Norme
Farmacopea Europea.
Presentazione
20 piastre pronte da 90 mm con 21 ± 2 mL.
Descrizione e tecnica
Descrizione
L'uso di terreni ricchi di nutrienti come PCA o TSA permette la crescita della maggior parte dei microrganismi, ma non il recupero degli organismi stressati o resistenti al cloro. Usando un terreno povero di nutrienti come R2A, insieme a una temperatura più bassa e a un tempo di incubazione più lungo, è possibile indurre la rivitalizzazione di queste cellule danneggiate.
In R2A Agar la fonte di azoto è il peptone e l'estratto di lievito fornisce le vitamine e i fattori di crescita. La fonte di carbonio è il destrosio; il solfato di magnesio e il fosfato di potassio mantengono la pressione osmotica. L'amido è un detossificante e il piruvato di sodio aumenta il recupero delle cellule stressate. L'agar agisce da gelificante.
Tecnica
Il campione di acqua va analizzato il prima possibile. Se non è possibile analizzarlo entro le prime 6 ore, il campione va refrigerato, ma non per più di 30 ore.
R2A Agar si può usare per piastre per inclusione, piastre per striscio o filtrazione. Il metodo per inclusione può influire sulla capacità di recupero del terreno, per lo shock termico quando si mescola l'agar fuso con il campione. Con l'incubazione a 35 °C si raccomanda un periodo di incubazione di 3-5 giorni. Nella maggior parte dei casi è più efficace una temperatura di incubazione di 20-25 °C per 5-7 giorni. Le piastre vanno protette dalla disidratazione.
Presentazione
| Presentazione | 20 piastre pronte da 90 mm |
|---|---|
| Riempimento | 21 ± 2 mL |
| Confezione | 1 scatola con 2 confezioni da 10 piastre. Film singolo in BOPP. Ogni confezione porta un indicatore di irraggiamento attaccato sul lato della busta (8-14 kGy), con essiccante. Etichettatura laterale. |
Composizione
| Componente | g/L |
|---|---|
| Proteoso peptone | 0,500 |
| Peptone di caseina | 0,500 |
| Estratto di lievito | 0,500 |
| Glucosio | 0,500 |
| Amido solubile | 0,500 |
| Piruvato di sodio | 0,300 |
| Fosfato dipotassico | 0,300 |
| Solfato di magnesio | 0,024 |
| Agar | 15,000 |
Controllo qualità
Controllo fisico-chimico
| Colore | Giallo pallido |
|---|---|
| pH | 7,2 ± 0,2 a 25 °C |
Controllo microbiologico
Filtrazione su membrana; intervallo pratico 10-100 UFC (produttività) secondo la Farmacopea Europea.
Aerobiosi. Incubazione a 32,5 ± 2,5 °C. Lettura a 24-72 h per i batteri e a 5-7 giorni per lieviti e muffe.
Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.
Ps. aeruginosa ed E. coli: doppia temperatura di incubazione, 30-35 °C / 20-25 °C.
Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.
| Microrganismo | Crescita |
|---|---|
| Escherichia coliATCC 8739, WDCM 00012 | Buona (≥ 70 %) |
| Staphylococcus aureusATCC 6538, WDCM 00032 | Buona (≥ 70 %) |
| Bacillus subtilisATCC 6633, WDCM 00003 | Buona (≥ 70 %) |
| Aspergillus brasiliensisATCC 16404, WDCM 00053 | Buona (≥ 70 %) |
| Candida albicansATCC 10231, WDCM 00054 | Buona (≥ 70 %) |
| Ps. aeruginosaATCC 9027, WDCM 00026 | Buona (≥ 70 %) |
| E. coliATCC 8739, WDCM 00012 (20-25 °C) | Buona (≥ 70 %) |
| Ps. aeruginosaATCC 9027, WDCM 00026 (20-25 °C) | Buona (≥ 70 %) |
| Ps. aeruginosa (paraeruginosa)ATCC 9027, WDCM 00026 | Buona (≥ 70 %) |
| Ps. aeruginosa (paraeruginosa)ATCC 9027, WDCM 00026 (20-25 °C) | Buona (≥ 70 %) |
Controllo di sterilità
Incubazione 48 h a 30-35 °C e 48 h a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.
Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.
Bibliografia
- ATLAS, R.M. (1995) Handbook of Media for Environmental Microbiology. CRC Press. Boca Raton. Fla. USA.
- CLESCERI, L.S., A.E. GREENBERG and A.D. EATON (1998) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 20th ed. APHA Washington D.C. USA.
- EATON, A.D., A.E. GREENBERG and L.S. CLESCERI (1995). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 19th ed. APHA Washington D.C. USA.
- EUROPEAN PHARMACOPOEIA. 10th ed. Suppl 6.3 (2020). General Monographs. Water for injections. (pg. 4339) EDQM. Council of Europe. Strasbourg.
- GREENBERG, A.E., R.R. TRUSSELL and L.S. CLESCERI (1985). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 16th ed. APHA-AWWA-WPCF. Washington D.C. USA.
- REASONER, D.J. and E.E. GELDREICH (1979) A new Medium for the enumeration and subculture of bacteria from potable water. Abstracts of Annual Meeting. ASM 79th Meeting. Paper #N7.
- Van SOETSBERGER, A.A. and C.H. LEE (1969) Pour plates or streak plates? Appl. Microbiol. 18:1092-1094.
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