MacConkey No. 3 Agar EP/USP/ISO

Descrizione

I progressi nella comprensione della fisiologia batterica hanno permesso di adattare il terreno per facilitare la rilevazione dei coliformi. Le due modifiche più importanti della formulazione originale sono le seguenti:

• La sostituzione della bile di bue con sali biliari purificati, che migliora la selettività ed evita la torbidità propria della bile, dovuta alla sua composizione grassa. L'efficacia dell'inibizione dovuta ai sali biliari è variabile e dipende dalla concentrazione relativa di colato e taurocolato.
• L'aggiunta di inibitori supplementari come il cristal violetto e/o il verde brillante. È una formulazione diffusa in America, ma non in Europa, dove si preferisce una selettività più bassa.
• I batteri lattosio-positivi cresciuti su questo terreno formano colonie rosse per la produzione di acido dovuta alla fermentazione del lattosio; per questo le colonie di Escherichia coli si distinguono facilmente, perché formano anche una piccola zona di precipitazione dei sali biliari intorno a sé.

Possono crescere anche alcuni enterococchi, ma si distinguono facilmente dai coliformi, perché formano colonie più piccole e non hanno la zona di precipitazione.

Tecnica

Per l'inoculo delle piastre seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili (metodo di semina a spirale, metodi ecometrici, semina per striscio, serie di diluizioni, spatolamento con spatola di Drigalski, ecc.).

Per la conta, dopo un'incubazione di 24 ore a 35 °C, scegliere le piastre con 30-150 colonie. Le colonie caratteristiche vanno confermate come coliformi con la produzione di gas dal lattosio in una coltura in brodo.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Prova di promozione della crescita con 50-100 UFC secondo le monografie armonizzate della Farmacopea (EP) e i metodi di prova, e secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ (selettività), < 100 UFC (specificità, Farmacopea Europea) e ≥ 10³ UFC (specificità, ISO).

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Aerobiosi. Incubazione a 30-35 °C. Lettura a 18-72 h.

S. sonnei: incubazione a 37 °C per 20-24 h.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 h a 30-35 °C e 48 h a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• ATLAS, R.M., L.C. PARKS (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London.
• CLESCERI, L.S., A.E. GREENBERG & A.D. EATON (1998) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 20th ed. APHA-AWWA-WEF. Washington. DC. USA.
• DOWNES, F.P. & K. ITO (2001) Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4th ed. APHA. Washington.
• EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0 (2014) 8th ed. § 2.6.13. Microbiological examination of non-sterile products: Test for specified microorganisms. Harmonised Method. EDQM. Council of Europe. Strasbourg.
• HITCHINS, A.D., P. FENG, W.D. WATKINS, S.R. RIPEY & C.A. CHANDLER (1998) E. coli and coliform bacteria. Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. AOAC International. Gaithersburg. MD. USA.
• HORWITZ, W. (2000) Official Methods of Analysis. AOAC Intl. Gaithersburg. MD. USA.
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
• ISO 21150:2015. Standard. Cosmetics - Detection of E. coli.
• MacCONKEY, A.T. (1905) Lactose-fermenting Bacteria in faeces. J. Hyg 5:333.
• MURRAY, P.R., E.J. BARON, M.A. PFALLER, F.C. TENOVER & R.H. YOLKEN (Eds) (1995) Manual of Clinical Microbiology. 6th ed. A.S.M. Washington. DC. USA.
• RAPPAPORT, F. & E. HENING (1952) Media for the isolation and differentiation of pathogenic E. coli (serotypes O111 and O55). J. Clin. Pathology 5:361-362.
• USP 33 - NF 28 (2011) <62> Microbiological examination of non-sterile products: Test for specified microorganisms. Harmonised Method. USP Corp. Inc. Rockville. MD. USA.
• VARNAM, A.H. & M.G. EVANS (1991) Foodborne pathogens. Manson Publishing Ltd. London. UK.
• WHO (1963) International Standards for Drinking Waters. 7th ed. Churchill Ltd. London.