Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) ISO

Il terreno di Rappaport è stato modificato da Vassiliadis riducendo la concentrazione di verde malachite e aumentando la temperatura di incubazione, ottenendo così una migliore stabilità del pH del terreno preparato e ottimizzando la concentrazione di cloruro di magnesio, con un migliore recupero delle salmonelle.

Il peptone di soia fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. I fosfati di potassio bilanciano il pH basso del terreno, insieme alla presenza del cloruro di magnesio, che aumenta la pressione osmotica, e del verde malachite, che inibisce gli altri microrganismi. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico.

Preparazione

Sospendere 26,6 grammi di terreno in 1 litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 115 °C per 15 minuti. NON SURRISCALDARE.

Secondo ISO 6579

Per la rilevazione di Salmonella spp. negli alimenti, nei mangimi, nelle feci animali e nei campioni ambientali secondo ISO 6579:

1. Pre-arricchimento in terreno liquido non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o le diluizioni e incubare a 34-38 °C per 18 ± 2 h.
2. Arricchimento in o su terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di pre-arricchimento, inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) o Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis medium (MSRV) (LC-1376), e MKTTN Broth (LC-1173). Rappaport Soy Broth e Modified Semisolid Rappaport medium si incubano a 41,5 °C per 24 ± 3 h, MKTTN Broth a 34-38 °C per 24 ± 3 h.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo, inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar (LC-1274) e un qualunque altro terreno selettivo complementare a XLD agar (Salmonella Chromogenic Agar (LC-1122), Brilliant Green Agar (LC-1143), Bismuth Sulfite Agar (LC-1011), DCLS Agar (LC-1045), Desoxycholate Citrate Agar (LC-1067), Hektoen Enteric Agar (LC-1030), Salmonella Shigella Agar (LC-1064) e XLT4 Agar (LC-1159)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 34-38 °C per 24 ± 3 h. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

Nota: secondo l'allegato D di ISO 6579-1:2017, per la rilevazione dei sierotipi Typhi e Paratyphi di enterica sottospecie enterica, si deve aggiungere Selenite Cystine Broth (LC-1220) come terreno di arricchimento selettivo e scegliere Bismuth Sulfite Agar (Wilson Blair) come secondo terreno selettivo (LC-1011).

Secondo ISO 19250

Per la rilevazione di Salmonella spp. nei campioni di acqua secondo ISO 19250:

1. Pre-arricchimento in terreno non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o le diluizioni e incubare a 34-38 °C per 18 ± 2 h.
2. Arricchimento in terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di pre-arricchimento, inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) e MKTTN Broth (LC-1173). Rappaport Soy Broth si incuba a 41,5 ± 1 °C e MKTTN Broth a 34-38 °C, entrambi per 24 ± 3 ore.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo, inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar (LC-1274) e un qualunque altro terreno selettivo complementare a XLD agar (per esempio Brilliant Green Agar (LC-1143) o Bismuth Sulfite Agar (LC-1011)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 34-38 °C per 24 ± 3 ore. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

• Rappaport F., Konforti N. and Navon B. (1956) J. Clin Pathol., 9,261.
• Peterz M., Wiberg C. and Norberg P. (1989) J. Appl. Bact. 66: 523-528.
• UNE-EN-ISO 6579. Food Microbiology for human consumption and Animal Feed. Horizontal Method for the detection of Salmonella spp.
• ISO 19250 Water quality - Detection of Salmonella spp.
• ISO 6579 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp. Amendment 1: Broader range of incubation temperatures, amendment to the status of Annex D, and correction of the composition of MSRV and SC.