Muller Kaufmann Broth Base with Brilliant Green and Novobiocin (MKTTN) ISO

L'estratto di manzo e il peptone di caseina forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. Il carbonato di calcio è un neutralizzante che assorbe i metaboliti tossici. I sali biliari, il verde brillante e la novobiocina inibiscono i microrganismi diversi da Salmonella. La selettività si ottiene anche con il tiosolfato di sodio e il tetrationato, che sopprimono i coliformi. Il tetrationato si forma nel terreno con l'aggiunta della soluzione di iodio e ioduro di potassio. I microrganismi che possiedono l'enzima tetrationato reduttasi si sviluppano bene in questo terreno. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico.

Preparazione

Sospendere 89,53 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. EVITARE IL SURRISCALDAMENTO. NON STERILIZZARE IN AUTOCLAVE. Raffreddare a 45-50 °C. Aggiungere in condizioni asettiche 20 mL di una soluzione di iodio e ioduro di potassio (20 g di iodio e 25 g di ioduro di potassio in 100 mL di acqua distillata sterile). Omogeneizzare delicatamente e distribuire in contenitori sterili.

Secondo ISO 6579

Per la rilevazione di Salmonella spp. negli alimenti, nei mangimi, nelle feci animali e nei campioni ambientali secondo ISO 6579:

1. Pre-arricchimento in terreno liquido non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o le diluizioni e incubare a 34-38 °C per 18 ± 2 h.
2. Arricchimento in o su terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di pre-arricchimento, inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) (LC-1174) o Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis medium (MSRV) (LC-1376), e MKTTN Broth. Rappaport Soy Broth e Modified Semisolid Rappaport medium si incubano a 41,5 °C per 24 ± 3 h, MKTTN Broth a 34-38 °C per 24 ± 3 h.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo, inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar (LC-1274) e un qualunque altro terreno selettivo complementare a XLD agar (Salmonella Chromogenic Agar (LC-1122), Brilliant Green Agar (LC-1143), Bismuth Sulfite Agar (LC-1011), DCLS Agar (LC-1045), Desoxycholate Citrate Agar (LC-1067), Hektoen Enteric Agar (LC-1030), Salmonella Shigella Agar (LC-1064) e XLT4 Agar (LC-1159)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 34-38 °C per 24 ± 3 h. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

Nota: secondo l'allegato D di ISO 6579-1:2017, per la rilevazione dei sierotipi Typhi e Paratyphi di enterica sottospecie enterica, si deve aggiungere Selenite Cystine Broth (LC-1220) come terreno di arricchimento selettivo e scegliere Bismuth Sulfite Agar (Wilson Blair) come secondo terreno selettivo (LC-1011).

Secondo ISO 19250

Per la rilevazione di Salmonella spp. nei campioni di acqua secondo ISO 19250:

1. Pre-arricchimento in terreno non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o le diluizioni e incubare a 34-38 °C per 18 ± 2 h.
2. Arricchimento in terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di pre-arricchimento, inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) (LC-1174) e MKTTN Broth. Rappaport Soy Broth si incuba a 41,5 ± 1 °C e MKTTN Broth a 34-38 °C, entrambi per 24 ± 3 ore.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo, inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar (LC-1274) e un qualunque altro terreno selettivo complementare a XLD agar (per esempio Brilliant Green Agar (LC-1143) o Bismuth Sulfite Agar (LC-1011)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 34-38 °C per 24 ± 3 ore. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

• ISO 6579 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp.
• ISO 6579 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp. Amendment 1: Broader range of incubation temperatures, amendment to the status of Annex D, and correction of the composition of MSRV and SC.
• Kauffmann, F. 1935. Weitere erfahrungen mit dem kombinierten anreicherungsverfahren fur Salmonella bazillen. Ztschr. F. Hyg. 117: 26-32.
• ISO 19250 Water quality - Detection of Salmonella spp.