Brilliant Green Agar Modified ISO

Brilliant Green Agar Modified inibisce la crescita di Pseudomonas aeruginosa e inibisce parzialmente la crescita di Proteus spp., che possono avere un aspetto simile a Salmonella.

Salmonella può essere presente in piccolo numero ed è spesso accompagnata da un numero molto più grande di altre Enterobacteriaceae o di batteri di altre famiglie. Si usa una fase di pre-arricchimento per permettere la rilevazione di Salmonella presenti in piccolo numero o danneggiate.

L'estratto di manzo, il peptone di caseina e il peptone di carne forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B, essenziali per la crescita batterica. Il lattosio e il saccarosio sono i carboidrati fermentabili che forniscono carbonio ed energia. Il rosso fenolo è l'indicatore di pH. Il verde brillante inibisce i batteri Gram-positivi e la maggior parte dei Gram-negativi, eccetto Salmonella. Se il terreno si surriscalda, il verde brillante può perdere le sue proprietà. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

La norma ISO 6579 raccomanda Brilliant Green Agar come secondo terreno selettivo.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 54,7 grammi di terreno disidratato in un litro di acqua distillata e lasciar riposare per 15 minuti. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. EVITARE DI SURRISCALDARE. NON STERILIZZARE IN AUTOCLAVE. Distribuire in contenitori adatti.

Istruzioni per l'uso

Per la rilevazione di Salmonella spp. negli alimenti, nei mangimi, nelle feci animali e nei campioni ambientali:

1. Pre-arricchimento in terreno liquido non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o con le diluizioni e incubare a 34-38 °C per 18 h.
2. Arricchimento in/su terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di pre-arricchimento, inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) (LC-1174) o Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis medium (MSRV) (LC-1376), e Tetrathionate Broth (Muller-Kauffmann) (LC-1173). Rappaport Soy Broth e Modified Semisolid Rappaport medium si incubano a 41,5 °C per 24 h, Tetrathionate Broth a 37 °C per 24 h.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo, inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar (LC-1274) e un altro terreno selettivo complementare a XLD agar (Salmonella Chromogenic Agar (LC-1122), Brilliant Green Agar, Bismuth Sulfite Agar (LC-1011), DCLS Agar (LC-1045), Desoxycholate Citrate Agar (LC-1067), Hektoen Enteric Agar (LC-1030), Salmonella Shigella Agar (LC-1064) e XLT4 Agar (LC-1159)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 37 °C per 24 ± 3 h. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

Per la rilevazione di Salmonella spp. nei campioni di acqua:

1. Pre-arricchimento in terreno non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o con le diluizioni e incubare a 36 ± 2 °C per 18 ± 2 h.
2. Arricchimento in terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di pre-arricchimento, inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) (LC-1174) e Tetrathionate Broth (Muller-Kauffmann) (LC-1173). Rappaport Soy Broth si incuba a 41,5 ± 1 °C e Tetrathionate Broth a 37 ± 1 °C, tutti e due per 24 ± 3 ore.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo, inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar (LC-1274) e un altro terreno selettivo complementare a XLD agar (per esempio Brilliant Green Agar o Bismuth Sulfite Agar (LC-1011)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 36 ± 2 °C per 24 ± 3 ore. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

• UNE-EN-ISO 6579 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp.
• ISO 19250 Water quality - Detection of Salmonella spp.