Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis Medium (MSRV) ISO

È una modifica del brodo di arricchimento Rappaport Vassiliadis per rilevare Salmonella spp. mobili nelle feci, nei prodotti alimentari e nei campioni ambientali. In questo terreno la rilevazione si basa soprattutto sulla motilità e sulla capacità di Salmonella di migrare attraverso il terreno selettivo prima dei microrganismi mobili concorrenti, producendo così aloni opachi di crescita.

La mobilità degli altri microrganismi è inibita dagli agenti selettivi (come il cloruro di magnesio, l'ossalato di verde malachite e la novobiocina) e dalla temperatura di incubazione di 42 °C.

Il triptosio e il peptone acido di caseina forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. Il cloruro di magnesio e l'ossalato di verde malachite inibiscono i microrganismi diversi da Salmonella spp. La novobiocina è un agente selettivo che inibisce i batteri Gram-positivi ed evita lo sviluppo di Proteus.

Questo terreno non è adatto alla rilevazione dei ceppi non mobili di Salmonella, la cui presenza è molto bassa (1 %).

Si raccomanda di eseguire prove sierologiche e biochimiche per la conferma delle specie di Salmonella.

Preparazione

Sospendere 31,6 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. EVITARE DI SURRISCALDARE. NON STERILIZZARE IN AUTOCLAVE. Distribuire in piastre di Petri.

Secondo ISO 6579

Per la rilevazione di Salmonella spp. negli alimenti, nei mangimi, nelle feci animali e nei campioni ambientali secondo ISO 6579:

1. Pre-arricchimento in terreno liquido non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o le diluizioni e incubare a 34-38 °C per 18 ± 2 h.
2. Arricchimento in/su terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di prearricchimento, inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) (LC-1174) oppure Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis Medium (MSRV), e MKTTN Broth (LC-1173). Rappaport Soy Broth e Modified Semisolid Rappaport Medium si incubano a 41,5 °C per 24 ± 3 h, MKTTN Broth a 34-38 °C per 24 ± 3 h.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo, inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar (LC-1274) e un qualunque altro terreno selettivo complementare a XLD agar (Salmonella Chromogenic Agar (LC-1122), Brilliant Green Agar (LC-1143), Bismuth Sulfite Agar (LC-1011), DCLS Agar (LC-1045), Desoxycholate Citrate Agar (LC-1067), Hektoen Enteric Agar (LC-1030), Salmonella Shigella Agar (LC-1064) e XLT4 Agar (LC-1159)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 34-38 °C per 24 ± 3 h. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

Nota: secondo l'allegato D di ISO 6579-1:2017, per la rilevazione dei sierotipi Typhi e Paratyphi di enterica sottospecie enterica, si deve aggiungere Selenite Cystine Broth (LC-1220) come terreno di arricchimento selettivo e scegliere Bismuth Sulfite Agar (Wilson Blair) come secondo terreno selettivo (LC-1011).

Secondo ISO 19250

Per la rilevazione di Salmonella spp. nei campioni di acqua secondo ISO 19250:

1. Pre-arricchimento in terreno non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o le diluizioni e incubare a 34-38 °C per 18 ± 2 h.
2. Arricchimento in terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di prearricchimento, inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) (LC-1174) e MKTTN Broth (LC-1173). Rappaport Soy Broth si incuba a 41,5 ± 1 °C e MKTTN Broth a 34-38 °C, tutti e due per 24 ± 3 ore.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo, inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar (LC-1274) e un qualunque altro terreno selettivo complementare a XLD agar (per esempio Brilliant Green Agar (LC-1143) o Bismuth Sulfite Agar (LC-1011)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 34-38 °C per 24 ± 3 ore. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

• De SMEDT et al.; Rapid Salmonella Detection in Foods by Motility Enrichment on a Modified Semi-Solid Rappaport-Vassiliadis Medium. J. Food Protect. Vol. 49, 7; 510-514 (1986).
• De SMEDT, a. BOLDERDIJK, R.F.; Dynamics of Salmonella Isolation with Modified Semi-Solid Rappaport-Vassiliadis Medium. J. Food Protect. Vol. 50, 8; 658-661 (1987).
• ISO 6579 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp. Amendment 1: Broader range of incubation temperatures, amendment to the status of Annex D, and correction of the composition of MSRV and SC.