XLD Agar (Xylose Lysine Desoxycholate Agar) ISO

Le reazioni sono la degradazione dei tre carboidrati fermentabili, xilosio, lattosio e saccarosio, con produzione di acido, che si manifesta con il viraggio del colore dal rosso al giallo. Il tiosolfato di sodio funge da sostanza reattiva con il citrato ferrico ammonico, come indicatore della formazione di idrogeno solforato in condizioni alcaline. La lisina è inclusa per permettere di differenziare il gruppo Salmonella dai non patogeni, perché in sua assenza le salmonelle fermenterebbero rapidamente lo xilosio e sarebbero indistinguibili dalle specie non patogene. Quando le salmonelle hanno esaurito lo xilosio presente, la lisina viene attaccata dall'enzima lisina decarbossilasi, con un passaggio a pH alcalino simile alla reazione di Shigella. I batteri che decarbossilano la L-lisina a cadaverina si riconoscono dalla presenza di un colore rosso porpora intorno alle colonie, dovuto all'innalzamento del pH. Il rosso fenolo è l'indicatore di pH. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B, essenziali per la crescita batterica. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. Il desossicolato di sodio è l'agente selettivo e quindi inibisce i microrganismi Gram-positivi. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Le colonie tipiche di Salmonella su XLD agar hanno un centro nero e una zona leggermente trasparente di colore rossastro, dovuta al viraggio dell'indicatore.

Le varianti H₂S-negative di Salmonella cresciute su XLD agar sono rosa con un centro rosa più scuro. Le Salmonella lattosio-positive cresciute su XLD agar sono gialle, con o senza annerimento.

Preparazione

Sospendere 54 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. EVITARE DI SURRISCALDARE. NON STERILIZZARE IN AUTOCLAVE. Raffreddare il terreno secondo la norma applicabile e versare in piastre di Petri appena si è raffreddato.

Evitare la preparazione di grandi volumi, il surriscaldamento e la conservazione prolungata a bagnomaria. Si possono formare precipitati, che non influiscono sulle prestazioni del terreno di coltura.

Secondo ISO 6579

Per la rilevazione di Salmonella spp. in alimenti, mangimi, feci animali e campioni ambientali secondo ISO 6579:

1. Pre-arricchimento in terreno liquido non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o le diluizioni e incubare a 34-38 °C per 18 ± 2 h.
2. Arricchimento in/su terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di pre-arricchimento inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) (LC-1174) o Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis Medium (MSRV) (LC-1376), e MKTTN Broth (LC-1173). Rappaport Soy Broth e Modified Semisolid Rappaport Medium si incubano a 41,5 °C per 24 ± 3 h, MKTTN Broth a 34-38 °C per 24 ± 3 h.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar e un altro terreno selettivo complementare a XLD agar (Salmonella Chromogenic Agar (LC-1122), Brilliant Green Agar (LC-1143), Bismuth Sulfite Agar (LC-1011), DCLS Agar (LC-1045), Desoxycholate Citrate Agar (LC-1067), Hektoen Enteric Agar (LC-1030), Salmonella Shigella Agar (LC-1064) e XLT4 Agar (LC-1159)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 34-38 °C per 24 ± 3 h. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

Nota: secondo l'allegato D di ISO 6579-1:2017, per la rilevazione dei sierotipi Typhi e Paratyphi di enterica sottospecie enterica, si deve aggiungere Selenite Cystine Broth (LC-1220) come terreno di arricchimento selettivo e scegliere Bismuth Sulfite Agar (Wilson Blair) come secondo terreno selettivo (LC-1011).

Secondo ISO 19250

Per la rilevazione di Salmonella spp. nei campioni di acqua secondo ISO 19250:

1. Pre-arricchimento in terreno non selettivo: inoculare Buffered Peptone Water (LC-1402) con il campione o le diluizioni e incubare a 34-38 °C per 18 ± 2 h.
2. Arricchimento in terreni selettivi: con la coltura ottenuta nella fase di pre-arricchimento inoculare Rappaport Soy Broth (Vassiliadis) (LC-1174) e MKTTN Broth (LC-1173). Rappaport Soy Broth si incuba a 41,5 ± 1 °C e MKTTN Broth a 34-38 °C, entrambi per 24 ± 3 ore.
3. Semina su terreni solidi selettivi: dalle colture di arricchimento selettivo inoculare due agar selettivi di isolamento: XLD agar e un altro terreno selettivo complementare a XLD agar (per esempio Brilliant Green Agar (LC-1143) o Bismuth Sulfite Agar (LC-1011)). Incubare le piastre di XLD capovolte a 34-38 °C per 24 ± 3 ore. Incubare il secondo terreno selettivo secondo le istruzioni del produttore.
4. Conferma: trapiantare le colonie presuntive di Salmonella e confermarne l'identità con prove biochimiche e sierologiche.

• International Standard UNE-EN-ISO 6579. Food Microbiology for human consumption and Animal Feed. Horizontal Method for the detection of Salmonella spp.
• ISO 19250 Water quality - Detection of Salmonella spp.
• ISO 6579 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp. Amendment 1: Broader range of incubation temperatures, amendment to the status of Annex D, and correction of the composition of MSRV and SC.