sLB Agar

Sulla base dei risultati di ricerche approfondite è stata sviluppata una nuova formulazione con una miscela proprietaria di peptoni, estratto di lievito e sali, che permette alle cellule ricombinanti di E. coli una crescita maggiore. Alla fine della fase logaritmica la replicazione continua e si ottengono così rese più elevate di DNA plasmidico.

Le colture in sLB Agar hanno mostrato stabilità cellulare fino a 3 giorni senza morte cellulare: è quindi un terreno più pratico, che elimina la necessità di un'attenzione costante. Dopo 3 giorni a 37 °C la crescita di E. coli è maggiore nei terreni sLB che nel terreno LB standard.

La miscela speciale di peptoni, l'estratto di lievito, l'agar e i sali forniscono fattori di crescita essenziali come azoto, carbonio, zolfo, minerali e vitamine, in particolare del gruppo B. Il cloruro di sodio fornisce elettroliti essenziali, come gli ioni sodio, per il trasporto e l'equilibrio osmotico. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Preparazione

Sospendere 55 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 45-50 °C, mescolare bene e distribuire in piastre.

Istruzioni per l'uso

1. Inoculare una provetta da 15 mL di sLB Broth (LC-1163) con il campione di E. coli.
2. Incubare a 37 °C per 24 ore in anaerobiosi.
3. Prelevare 10 µL di un'aliquota a 10⁴ cellule/mL e inoculare piastre di sLB Agar con una spatola di Drigalski.
4. Incubare a 37 °C per una notte.

• Ausubel, Brent, Kingston, Moore, Seidman, Smith and Struhl (ed.). 1994. Current protocols in molecular biology, vol. 1. Greene Publishing Associates, Inc., Brooklyn, N.Y.