Terreni disidratati
Acetamide Broth Base ISO
Per la conferma di Pseudomonas aeruginosa con la filtrazione su membrana.
- Codice
- LC-1155
- Categoria
- Terreni disidratati
- Formato
- 500 g
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 15 mesi
- Norme
- ISO 16266
Acetamide Broth Base ISO contiene acetammide, che è l'unica fonte di carbonio. Si usa per la conferma e l'identificazione di Pseudomonas aeruginosa, come previsto dalla norma ISO 16266. Sfrutta la capacità dei batteri Gram-negativi non fermentanti di deaminare l'acetammide. La deaminazione dell'acetammide produce ammoniaca, che aumenta il pH del terreno; la deaminazione dell'acetammide è eseguita da P. aeruginosa, P. acidovorans, Gruppo III (Achromobacter xylosoxidans) e Alcaligenes odorans.
Caratteristiche principali
Settori
Acque.
Norme
ISO 16266.
Preparazione
3,4 g in 900 mL di acqua distillata, più 1 mL di Soluzione B, fino a un litro; sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.
Principio e uso
L'acetammide è l'unica fonte di carbonio. Il sale di potassio ha un'elevata capacità tampone e il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico.
È preparato secondo la norma ISO 16266.
Pseudomonas aeruginosa è un patogeno opportunista per l'uomo, capace di crescere in acque con una bassa concentrazione di nutrienti. Per questo le acque minerali naturali e le acque di sorgente sono prive di Pseudomonas aeruginosa al momento della commercializzazione. Questo microrganismo si può trovare anche nell'acqua delle piscine.
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Polvere fine |
| Colore del terreno disidratato | Beige |
| Colore del terreno preparato | Incolore |
| pH finale (25 °C) | 7,0 ± 0,5 |
| Quantità per litro | 3,4 g |
| Conservazione | da 2 a 25 °C |
Formula
| Componente | g/L |
|---|---|
| Acetammide | 2 |
| Solfato di magnesio | 0,2 |
| Fosfato monopotassico | 1 |
| Cloruro di sodio | 0,2 |
Soluzione B
| Componente | Quantità |
|---|---|
| Molibdato di sodio | 0,50 g |
| Solfato ferroso eptaidrato | 0,05 g |
| Acqua distillata | 100 mL |
Preparazione e uso
Preparazione
Sospendere 3,4 grammi di terreno in 900 mL di acqua distillata. Regolare il pH a 7,0 ± 0,5 a 25 °C. Aggiungere un mL di Soluzione B preparata di recente. Sempre agitando, aggiungere acqua fino a un volume finale di un litro. Distribuire in provette in aliquote da 5 mL, chiudere e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Le provette preparate vanno conservate al buio.
Secondo ISO 16266
Per la rilevazione e la conta di Pseudomonas aeruginosa secondo ISO 16266:
- Filtrare un certo volume del campione di acqua attraverso una membrana filtrante e porre la membrana su una piastra di Pseudomonas CN Agar Base (LC-1153).
- Incubare a una temperatura di 36 ± 2 °C per 44 ± 4 h.
- Contare come P. aeruginosa confermati le colonie con pigmentazione verde/blu (piocianina).
- Esaminare la membrana alla luce UV.
- Tutte le colonie con fluorescenza (+) e le colonie bruno-rossastre vanno confermate.
- Seminare tutte le colonie da confermare su piastre di Nutrient Agar (LC-1156) per ottenere colture pure. Incubare a 36 ± 2 °C per 22 ± 2 h.
- Eseguire la prova dell'ossidasi sulle colonie bruno-rossastre.
- Seminare per striscio le colonie ossidasi (+) su King B Medium per verificare la produzione di fluorescenza. Incubare a 36 ± 2 °C per un massimo di 5 giorni. Di solito bastano 24 ore.
- Inoculare tutte le colonie con fluorescenza (+), sia su CN agar sia su King B Medium, in Acetamide Broth (questo terreno o LC-2017) e aggiungere una o due gocce di reattivo di Nessler per verificare la produzione di ammoniaca. Incubare a 36 ± 2 °C per 22 ± 2 h.
- Si contano come P. aeruginosa confermati le colonie che producono piocianina su CN agar, le colonie con fluorescenza (+) su CN agar e ammoniaca (+) in Acetamide Broth, e le colonie bruno-rossastre su CN agar ossidasi (+), con fluorescenza (+) su King B Agar e ammoniaca (+) in Acetamide Broth.
Controllo qualità
Prova microbiologica
Condizioni di incubazione: 36 ± 2 °C / 22 ± 2 h.
| Microrganismo | Specifica | Reazione caratteristica |
|---|---|---|
| Pseudomonas aeruginosaATCC 10145 | Crescita buona | Produzione di ammonio |
| Pseudomonas aeruginosaATCC 27853 | Crescita buona | Produzione di ammonio |
| Pseudomonas aeruginosaATCC 9027 | Crescita buona | Produzione di ammonio |
Bibliografia
- ISO 16266 Water quality - Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa - Method by membrane filtration
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