Pseudomonas CN Agar Base ISO

Pseudomonas aeruginosa è un patogeno opportunista per l'uomo, capace di crescere in acque con una bassa concentrazione di nutrienti. Per questo le acque minerali naturali e le acque di sorgente devono essere controllate per verificare che siano prive di Pseudomonas aeruginosa al momento della commercializzazione. Questo microrganismo si può trovare anche nell'acqua delle piscine.

Il peptone e la caseina forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. La cetrimide è aggiunta come agente selettivo, e l'acido nalidixico per sopprimere i contaminanti dei terreni con cetrimide come Klebsiella, Proteus e Providencia spp. Il solfato di potassio e il cloruro di magnesio forniscono cationi che attivano la produzione di piocianina e aumentano la produzione di pigmento. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 50,6 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Aggiungere 10 mL di glicerolo. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 118 °C per 15 minuti. Raffreddare a 45-50 °C, mescolare bene e distribuire in piastre in modo da ottenere uno strato di agar di almeno 5 mm di spessore. Non rifondere il terreno.

Secondo ISO 16266

Per la rilevazione e la conta di Pseudomonas aeruginosa secondo ISO 16266:

1. Filtrare un certo volume del campione di acqua attraverso una membrana filtrante e porre la membrana su una piastra di Pseudomonas CN Agar Base.
2. Incubare a una temperatura di 36 ± 2 °C per 44 ± 4 h.
3. Contare come P. aeruginosa confermati le colonie con pigmentazione verde/blu (piocianina).
4. Esaminare la membrana alla luce UV.
5. Tutte le colonie con fluorescenza (+) e le colonie bruno-rossastre vanno confermate.
6. Seminare tutte le colonie da confermare su piastre di Nutrient Agar (LC-1156) per ottenere colture pure. Incubare a 36 ± 2 °C per 22 ± 2 h.
7. Eseguire la prova dell'ossidasi sulle colonie bruno-rossastre.
8. Seminare per striscio le colonie ossidasi (+) su King B Medium (LC-1532) per verificare la produzione di fluorescenza. Incubare a 36 ± 2 °C per un massimo di 5 giorni. Di solito bastano 24 ore.
9. Inoculare tutte le colonie con fluorescenza (+), sia su CN agar sia su King B Medium, in Acetamide Broth (LC-1155 o LC-2017) e aggiungere una o due gocce di reattivo di Nessler per verificare la produzione di ammoniaca. Incubare a 36 ± 2 °C per 22 ± 2 h.
10. Si contano come P. aeruginosa confermati le colonie che producono piocianina su CN agar, le colonie con fluorescenza (+) su CN agar e ammoniaca (+) in Acetamide Broth, e le colonie bruno-rossastre su CN agar ossidasi (+), con fluorescenza (+) su King B Agar e ammoniaca (+) in Acetamide Broth.

• UNE-EN 12780:2002, Quality of water. Identification and enumeration of Pseudomonas aeruginosa by membrane filtration.
• EN ISO 16266 Water quality - Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa - Method by membrane filtration