Acetamide Broth ISO

L'acetammide è l'unica fonte di carbonio. Il sale di potassio ha un'elevata capacità tampone e il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. Il solfato di magnesio, il molibdato di sodio e il solfato di ferro permettono la crescita selettiva di Pseudomonas nel terreno.

È preparato secondo la norma ISO 16266.

Pseudomonas aeruginosa è un patogeno opportunista per l'uomo, capace di crescere in acque con una bassa concentrazione di nutrienti. Per questo le acque minerali naturali e le acque di sorgente sono prive di Pseudomonas aeruginosa al momento della commercializzazione. Questo microrganismo si può trovare anche nell'acqua delle piscine.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 3,4 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in provette in aliquote da 5 mL, chiudere e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Secondo ISO 16266

Per la rilevazione e la conta di Pseudomonas aeruginosa secondo ISO 16266:

1. Filtrare un certo volume del campione di acqua attraverso una membrana filtrante e porre la membrana su una piastra di Pseudomonas CN Agar Base (LC-1153).
2. Incubare a una temperatura di 36 ± 2 °C per 44 ± 4 h.
3. Contare come P. aeruginosa confermati le colonie con pigmentazione verde/blu (piocianina).
4. Esaminare la membrana alla luce UV.
5. Tutte le colonie con fluorescenza (+) e le colonie bruno-rossastre vanno confermate.
6. Seminare tutte le colonie da confermare su piastre di Nutrient Agar (LC-1156) per ottenere colture pure. Incubare a 36 ± 2 °C per 22 ± 2 h.
7. Eseguire la prova dell'ossidasi sulle colonie bruno-rossastre.
8. Seminare per striscio le colonie ossidasi (+) su King B Medium per verificare la produzione di fluorescenza. Incubare a 36 ± 2 °C per un massimo di 5 giorni. Di solito bastano 24 ore.
9. Inoculare tutte le colonie con fluorescenza (+), sia su CN agar sia su King B Medium, in Acetamide Broth (LC-1155 o questo terreno) e aggiungere una o due gocce di reattivo di Nessler per verificare la produzione di ammoniaca. Incubare a 36 ± 2 °C per 22 ± 2 h.
10. Si contano come P. aeruginosa confermati le colonie che producono piocianina su CN agar, le colonie con fluorescenza (+) su CN agar e ammoniaca (+) in Acetamide Broth, e le colonie bruno-rossastre su CN agar ossidasi (+), con fluorescenza (+) su King B Agar e ammoniaca (+) in Acetamide Broth.

• EN ISO 16266 Water quality - Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa - Method by membrane filtration