LB Broth (Lennox)

Questi ceppi derivano in genere da E. coli K12 e non sono in grado di produrre la vitamina B; per questo il terreno è formulato per favorire la crescita dei microrganismi esigenti dal punto di vista nutrizionale. Questo ceppo di E. coli è stato ulteriormente modificato con una mutazione specifica, per creare un ceppo auxotrofo che non è in grado di crescere su terreni nutrizionalmente carenti. La coltivazione in LB Broth permette alle cellule con un plasmide inserito di cominciare a esprimere i geni del plasmide trasformato, compreso il gene di resistenza all'antibiotico. Se gli E. coli trasformati vengono seminati direttamente su terreni agarizzati selettivi (LB Agar con antibiotico), compariranno meno colonie trasformate per mL seminato. La crescita delle cellule trasformate in LB Broth aumenta il numero di cellule trasformate per mL.

LB Broth (Lennox) contiene dieci volte il cloruro di sodio di Luria Broth (Miller’s Modification) (LC-1266) e la metà di quello di Luria Broth (Miller’s LB Broth) (LC-1551). Questo permette di scegliere il terreno con la concentrazione di sale ottimale per un ceppo specifico.

Il triptone fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è la fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. Questo terreno ha gli stessi componenti di LB Agar (Lennox), senza l'agar batteriologico. Se si desidera, si possono aggiungere anche antibiotici.

Preparazione

Sospendere 20 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Istruzioni per l'uso

1. Eseguire la procedura sperimentale secondo l'uso o lo scopo appropriato.
2. Inoculare e incubare a una temperatura di 35 ± 2 °C per 18-24 ore.

• Atlas, R.M., L.C. Parks (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London.
• Lennox. (1955). Virology 1:190.
• Sambrook, Fritsch and Maniatis. (1989). Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.