Listeria Enrichment Broth Base ISO

È raccomandato per la rilevazione di Listeria spp. nei prodotti alimentari e nei campioni ambientali. Tutte le specie di Listeria idrolizzano l'esculina a esculetina, che reagisce con gli ioni ferro e produce un annerimento del terreno. Un altro vantaggio di questo terreno è che l'aggiunta di citrato ferrico ammonico migliora la crescita di L. monocytogenes. Il cloruro di litio contenuto nel terreno, insieme all'acido nalidixico e all'acriflavina del supplemento, inibisce la crescita della flora di accompagnamento, che può idrolizzare l'esculina. L'alta quantità di cloruro di sodio inibisce la crescita degli enterococchi.

Il digerito enzimatico di caseina, il digerito enzimatico di tessuti animali e l'estratto di carne forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è la fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. I sali di fosfato agiscono da sistema tampone.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 28,7 grammi di terreno in 500 mL di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 45-50 °C e aggiungere in condizioni asettiche una fiala di Fraser Listeria Selective Supplement (LC-6001) per preparare Fraser Broth, oppure una fiala di Half Fraser Listeria Selective Supplement (LC-6002) per preparare Half Fraser Broth. Omogeneizzare delicatamente e distribuire in contenitori sterili.

Secondo ISO 11290

Rilevazione di Listeria monocytogenes e Listeria spp. secondo ISO 11290:

1. Arricchimento primario: pesare 25 g (o 25 mL) di campione e aggiungere 225 mL di Listeria Enrichment Broth Base Fraser addizionato di Half Fraser Listeria Selective Supplement (LC-6002). Omogeneizzare e incubare a 30 °C per 25 ± 1 ore.
2. Arricchimento secondario: inoculare 0,1 mL del terreno incubato prima (qualunque sia il suo colore) in 10 mL di Listeria Enrichment Broth Base Fraser addizionato di Selective Supplement for Listeria Fraser (LC-6001). Incubare a 37 °C per 24 ± 2 ore in aerobiosi.
3. Semina e identificazione: dalla coltura di arricchimento primario, inoculare Listeria Agar acc. to Ottaviani and Agosti (LC-1345) e l'altro terreno selettivo del laboratorio, per ottenere colonie ben separate. Dalla coltura di arricchimento secondario, ripetere la procedura: inoculare la superficie di Listeria Agar according to Ottaviani and Agosti e dell'altro terreno selettivo. Per Listeria Agar according to Ottaviani and Agosti, incubare per un totale di 48 ± 2 h.
4. Conferma: selezionare le colonie presuntive ed eseguire le prove di conferma per L. monocytogenes o Listeria spp.

• ISO 11290-1. Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes - Part 1: Detection method.
• Fraser J.A. and Sperber W.H (1988).
• McClain D. and Lee W.H (1988).