Terreni pronti all'uso
Listeria enrichment Broth Fraser ISO
Brodo per l'arricchimento selettivo di Listeria monocytogenes secondo la norma ISO.
- Codice
- LC-4024
- Categoria
- Terreni pronti all'uso
- Formati
- 2 formati
- Controllo qualità ISO 17025
- Sì
- Validità minima garantita
- 4 mesi
- Norme
- ISO 11290
Questa base di brodo per l'arricchimento di Listeria segue le modifiche apportate da Fraser e Sperber al terreno University of Vermont Medium (UVM). Questa formulazione è stata adottata dall'USDA-FSIS.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Rilevazione di Listeria.
Settori
Clinico, alimenti.
Norme
ISO 11290.
Controllo
Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.
Descrizione e tecnica
Descrizione
L'aggiunta di cloruro di litio inibisce lo sviluppo degli enterococchi, che possono idrolizzare l'esculina allo stesso modo di Listeria. Un eventuale annerimento del terreno, prodotto dalla reazione dell'esculetina, derivata dall'idrolisi dell'esculina, con il ferro presente nel terreno, si può considerare un'indicazione presuntiva di Listeria. Il citrato ferrico favorisce anche lo sviluppo di L. monocytogenes.
Fraser Broth si usa secondo EN ISO 11290-1 per la rilevazione di Listeria.
Tecnica
Per l'inoculo dei flaconi seguire il metodo standard del laboratorio o le norme applicabili (inoculo per infissione, inoculo con l'ansa, serie di diluizioni, ecc.).
La metodologia d'uso è descritta nella norma EN ISO 11290.
Anche se alcuni autori usano Fraser Broth come unico terreno di arricchimento, si è verificato che si ottengono risultati migliori se lo si impiega come fase di arricchimento secondario, con la metodologia seguente:
- Inoculare il campione in un brodo di arricchimento primario o in Lovett Broth e incubare per 18-24 ore.
- Prelevare aliquote di 0,1 mL, inocularle in provette con 10 mL di Fraser Broth e incubare per 24-28 ore.
- Le provette che anneriscono si considerano presuntivamente positive e vanno trapiantate su terreni solidi di isolamento e conferma, come Oxford Agar Base, Palcam Agar Base o Listeria Selective Agar secondo Ottaviani & Agosti. Le provette che restano limpide si considerano negative e si possono eliminare o, in caso di dubbio, incubare per altre 24 ore.
A seconda delle norme usate o dei campioni da analizzare, si possono usare tempi o temperature di incubazione diversi.
Nota: il terreno può mostrare la presenza di precipitati, che non ne alterano le prestazioni.
Presentazione
| Codice | Presentazione | Riempimento | Confezione |
|---|---|---|---|
| LC-4024 | 20 provette da 16 x 113 mm | 10 ± 0,2 mL | Provette di vetro da 16 x 113 mm, etichettatura a inchiostro, tappo metallico non perforabile. 20 provette per scatola. |
| LC-5023 | 10 flaconi pronti da 250 mL | 225 ± 5 mL | 1 scatola con 10 flaconi da 250 mL. Tappo bianco in polipropilene termoresistente. |
Composizione
| Componente | g/L |
|---|---|
| Peptone di carne | 5,000 |
| Peptone di caseina | 5,000 |
| Estratto di lievito | 5,000 |
| Estratto di carne | 5,000 |
| Cloruro di sodio | 20,000 |
| Idrogenofosfato disodico | 12,000 |
| Idrogenofosfato di potassio | 1,350 |
| Esculina | 1,000 |
| Cloruro di litio | 3,000 |
| Citrato ferrico ammonico | 0,500 |
| Acido nalidixico | 0,020 |
| Acriflavina | 0,025 |
Controllo qualità
Controllo fisico-chimico
| Colore | Bruno giallastro |
|---|---|
| pH | 7,2 ± 0,2 a 25 °C |
Controllo microbiologico
Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ (selettività).
Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.
Aerobiosi. Incubazione a 37 ± 1 °C, lettura dopo 24-48 ± 2 h.
| Microrganismo | Crescita |
|---|---|
| Escherichia coliATCC 8739 (1) | Inibito. Confermare in TSA a 37 ± 1 °C, lettura a 24 ± 3 h |
| Enterococcus faecalisATCC 19433 (2) | Inibizione parziale. Confermare in TSA a 37 ± 1 °C, lettura a 24 ± 3 h |
| Listeria monocytogenesATCC 13932, WDCM 00021 + (1) + (2) | > 10 UFC. Colonie blu-verdi con alone opaco (Ottaviani Agosti) |
| Listeria monocytogenesATCC 35152, WDCM 00109 + (1) + (2) | > 10 UFC. Colonie blu-verdi con alone opaco (Ottaviani Agosti) |
LC-5023, flaconi: controllo microbiologico
Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ (selettività).
Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.
Aerobiosi. Incubazione a 37 ± 1 °C, lettura dopo 24/44 ± 4 h.
| Microrganismo | Crescita |
|---|---|
| Escherichia coliATCC 8739 (1) | Inibito. Confermare in TSA a 37 ± 1 °C, lettura a 24 ± 3 h |
| Enterococcus faecalisATCC 19433 (2) | Inibizione parziale. Confermare in TSA a 37 ± 1 °C, lettura a 24 ± 3 h |
| Listeria monocytogenesATCC 13932, WDCM 00021 + (1) + (2) | > 10 UFC. Colonie blu-verdi con alone opaco (Ottaviani Agosti) |
| Listeria monocytogenesATCC 35152, WDCM 00109 + (1) + (2) | > 10 UFC. Colonie blu-verdi con alone opaco (Ottaviani Agosti) |
Controllo di sterilità
Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.
Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.
Bibliografia
- ATLAS, R.M. (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press. Boca Raton. Florida.
- FRASER, J.A. & W.H. SPERBER (1988) Rapid detection of Listeria spp. in food and environmental samples by esculin hydrolysis. J. Food Prot. 51:762-765.
- ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
- ISO 11290-1:2017 Standard. Microbiology of the food chain. Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes and for Listeria spp. - Part 1: Detection Method.
- ISO 11290-2:2017 Standard. Microbiology of the food chain. Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes and for Listeria spp. - Part 2: Enumeration Method.
- McCLAIN, D. & W.H. LEE (1988) Development of a USDA-FSIS method for isolation of Listeria monocytogenes from raw meat and poultry. J. AOAC 71:660-664.
- VANDERZANT, C. & D.F. SPLITTSTOESSER (1992) Compendium of methods for the microbiological examination of foods. APHA. Washington. DC.
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