Listeria Half-Fraser Broth Base ISO

Le Listeria spp. possono essere presenti in piccolo numero e sono spesso accompagnate da un numero molto più grande di altri microrganismi, perciò è necessario un arricchimento selettivo. Listeria Half-Fraser Broth si usa in questo arricchimento selettivo e nella conta di Listeria monocytogenes e delle altre specie di Listeria in tutti i tipi di alimenti, compresi il latte e i prodotti lattiero-caseari, e nei campioni ambientali. Questa formula è conforme alla norma ISO 11290.

Il digerito enzimatico di caseina, il digerito enzimatico di tessuti animali e l'estratto di carne forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è la fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. I fosfati di potassio agiscono come sistema tampone. Tutte le specie di Listeria idrolizzano l'esculina, che reagisce con gli ioni ferrici producendo un annerimento del terreno. L'aggiunta di citrato ferrico ammonico migliora la crescita di Listeria monocytogenes. Il cloruro di litio inibisce la crescita degli enterococchi che possono idrolizzare l'esculina.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 28,7 grammi di terreno in 500 mL di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 45-50 °C e aggiungere in condizioni asettiche una fiala di Ferric Ammonium Citrate Supplement (LC-6050). Omogeneizzare delicatamente e distribuire in contenitori sterili.

Secondo ISO 11290

Rilevazione di Listeria monocytogenes e Listeria spp. secondo ISO 11290:

1. Arricchimento primario: pesare 25 g (o 25 mL) di campione e aggiungere 225 mL di Listeria 1/2 Fraser Broth Base con l'aggiunta di Ferric Ammonium Citrate Supplement (LC-6050). Omogeneizzare e incubare a 30 °C per 25 ± 1 ore.
2. Arricchimento secondario: inoculare 0,1 mL del terreno precedente incubato (qualunque sia il suo colore) in 10 mL di Fraser Broth (LC-1182). Incubare a 37 °C per 24 ± 2 ore in aerobiosi.
3. Semina e identificazione: dalla coltura di arricchimento primario, inoculare Listeria Agar Base acc. to Ottaviani and Agosti (LC-1345) e l'altro terreno selettivo del laboratorio, per ottenere colonie ben separate. Dalla coltura di arricchimento secondario, ripetere la procedura: inoculare la superficie di Listeria Agar Base acc. to Ottaviani and Agosti e dell'altro terreno selettivo. Incubare Listeria Agar according to Ottaviani and Agosti per un totale di 48 ± 2 h.
4. Conferma: selezionare le colonie presuntive ed eseguire le prove di conferma per L. monocytogenes o Listeria spp.

• Fraser J.A. and Sperber W.H. (1988)
• McClain D. and Lee W.H. (1988)
• ISO 11290 Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes.