m-TEC Agar

Nel 1981 Dufour et al. svilupparono una semplice tecnica di filtrazione su membrana per la conta rapida di E. coli, che quantificava E. coli entro 24 ore senza richiedere trapianti e identificazione degli isolati.

Il digerito enzimatico di tessuti animali fornisce azoto, carbonio e minerali essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è una fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il lattosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. Il fosfato di potassio è un agente tampone. Il desossicolato di sodio inibisce la crescita dei batteri Gram-positivi. Il lauril solfato di sodio inibisce parzialmente i microrganismi diversi dai coliformi. Il porpora di bromocresolo e il rosso di bromofenolo sono indicatori di pH. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 45,3 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Substrato di urea

Unire 2 g di urea e 10 mg di rosso fenolo in 100 mL di acqua distillata. Portare il pH a 5,0 ± 0,3.

Istruzioni per l'uso

Tecnica di filtrazione su membrana:

1. Filtrare un volume adatto di campione su una membrana da 0,45 µm.
2. Porre la membrana sulla superficie di una piastra di agar, evitando la formazione di bolle d'aria.
3. Capovolgere le piastre e incubare a 44,5 ± 0,5 °C per 22 ± 2 ore.
4. Mettere un cuscinetto assorbente sterile in una piastra di Petri.
5. Aggiungere circa 2 mL di substrato di urea al cuscinetto (il cuscinetto deve essere saturo di substrato di urea, senza liquido in eccesso nella piastra di Petri).
6. Trasferire i filtri a membrana idonei alla conta sui cuscinetti saturi di substrato di urea.
7. Dopo 15-20 minuti, contare tutte le colonie gialle, da giallo-verdi a giallo-marroni.

• Clesceri L. S., Greenberg A. E. and Eaton A. D., (Ed.), 1998, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20th Ed., American Public Health Association, Washington, D.C.
• Dufour A. P., Strickland E. R. and Cabelli V. J., 1981, Appl. Environ. Microbiol., 41: 1152