Reinforced Clostridal Agar

Hirsch e Grinstead formularono Reinforced Clostridial Medium (LC-1007) e trovarono che questo terreno è superiore agli altri nel sostenere la crescita e nel dare conte cellulari elevate di clostridi. Incubato in anaerobiosi, questo terreno fa crescere vari anaerobi e altri batteri. Barnes e Ingram dimostrarono anche che può essere usato per sviluppare cellule vegetative nei saggi di Clostridium perfringens.

Il peptone e l'estratto di manzo forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il destrosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. L'amido nel terreno agisce come fattore di crescita, probabilmente come colloide protettore, e neutralizza i prodotti tossici che si formano durante lo sviluppo dei microrganismi. La L-cisteina cloridrato è l'agente riducente e l'acetato di sodio è il tampone. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Poiché è un terreno di arricchimento non selettivo, permette la crescita di vari microrganismi anaerobi e di batteri facoltativi quando è incubato in anaerobiosi.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 50 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 45-50 °C e, se si desidera, aggiungere 0,02 g/L di polimixina B in soluzione sterilizzata per filtrazione.

Istruzioni per l'uso

Metodo per inclusione:

1. Depositare 1 mL della sospensione iniziale e/o del campione diluito in una piastra di Petri vuota.
2. Aggiungere in ogni piastra di Petri 12-15 mL di agar raffreddato a 44-47 °C e mescolare delicatamente muovendo la piastra.
3. Lasciar solidificare le piastre e incubarle capovolte alla temperatura di 35 ± 2 °C per 40-48 ore in anaerobiosi.

• Barnes, E.M., J.E. Despaul and M. Ingram 1963. The behavior of a food poisoning strain of Clostridium welchii in beef. J. Appl. Bacteriol 26:415.
• MacFaddin J.F. 1985 Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. 1. p. 660-668. Williams & Wilkins, Baltimore MD.