Terreni pronti all'uso
Baird-Parker Medium Base ISO
Terreno di coltura selettivo per lo screening degli stafilococchi da campioni di vario tipo, secondo le farmacopee e le norme ISO e DIN.
- Codice
- LC-4677
- Categoria
- Terreni pronti all'uso
- Formati
- 2 formati
- Controllo qualità ISO 17025
- Sì
- Conservazione
- da 8 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 4 mesi
- Norme
- ISO 22718ISO 6888
Baird Parker Agar Base è raccomandato per la rilevazione e la conta degli stafilococchi negli alimenti e in altri materiali, perché permette una buona differenziazione dei ceppi coagulasi-positivi. La crescita dei batteri di accompagnamento è di solito soppressa dall'alta concentrazione di litio, glicina e piruvato. Il litio e la glicina favoriscono la crescita degli stafilococchi. A volte nel terreno possono crescere alcune specie di Bacillus, lieviti e, molto raramente, Proteus. La crescita di Proteus spp. si può sopprimere aggiungendo 50 mg/L di sulfametazina.
Caratteristiche principali
Isolamento selettivo degli stafilococchi coagulasi-positivi.
Cosmetico, alimenti.
ISO 22718, ISO 6888.
Descrizione e tecnica
Descrizione
La presenza di tellurito e tuorlo d'uovo, che vanno aggiunti al terreno dopo la sterilizzazione, permette di differenziare le colonie di stafilococchi presuntivamente patogeni. C'è un'alta correlazione tra la prova della coagulasi e la presenza di zone chiare di lipolisi in questo terreno, dovute alla lecitinasi stafilococcica. Gli studi mostrano che quasi il 100 % degli stafilococchi coagulasi-positivi è in grado di ridurre il tellurito, cosa che produce colonie nere, mentre gli altri stafilococchi non sempre ci riescono.
Tecnica
Per l'uso, il contenuto del flacone va versato in piastre. Il terreno di coltura va fuso secondo le istruzioni del produttore, a bagnomaria o nel forno a microonde. Non applicare mai calore diretto per fondere un terreno. Le temperature e i tempi di fusione dipendono dalla forma del contenitore, dal volume di terreno e dalla fonte di calore. Prima di fondere qualsiasi terreno, allentare il tappo a vite del contenitore per evitare che si rompa. Il terreno va fuso una sola volta e poi usato. I terreni con agar non vanno fusi più volte, perché le loro caratteristiche cambiano a ogni nuova fusione. Il surriscaldamento va evitato quanto il riscaldamento prolungato, soprattutto per i terreni a pH acido o alcalino. Una volta fuso il terreno, versare le piastre con tecniche asettiche.
Preparare il terreno completo aggiungendo 50 mL di emulsione sterile di tuorlo d'uovo + tellurito di potassio per litro di terreno. Omogeneizzare e distribuire in piastre.
Per l'inoculo seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili: metodo di semina a spirale, semina per striscio, metodi ecometrici, serie di diluizioni o spatolamento.
La metodologia d'uso segue la norma ISO 6888.
Dopo 24-48 ore di incubazione a 37 ± 1 °C, scegliere le colonie nere, lucide e convesse, con margini regolari, circondate da una zona chiara (lecitinasi +). Queste si possono identificare in via presuntiva come Staphylococcus aureus coagulasi-positivo. Per confermare la prova della coagulasi, inoculare la colonia nel terreno RPF Baird Parker Agar.
LC-4678, flaconi da 250 mL
Preparare il terreno completo aggiungendo 50 mL di emulsione sterile di tuorlo d'uovo + tellurito di potassio per litro di terreno. Le piastre vanno usate il giorno stesso della preparazione o entro 48 ore, per evitare che le zone di precipitazione perdano definizione. Il terreno base, senza tuorlo né tellurito, è perfettamente stabile e quindi si può fondere più volte.
La metodologia d'uso segue la norma EN ISO 6888.
L'inoculo si esegue distribuendo 0,5 mL di campione su ogni piastra con una spatola di Drigalski. Dopo 24-48 ore di incubazione a 37 ± 1 °C, scegliere le colonie nere, lucide e convesse, con margini regolari, circondate da una zona chiara. Queste si possono identificare in via presuntiva come Staphylococcus aureus coagulasi-positivo.
Presentazione
| Codice | Presentazione | Riempimento | Confezione |
|---|---|---|---|
| LC-4677 | 10 flaconi pronti da 125 mL | 90 ± 3 mL | 1 scatola con 10 flaconi da 125 mL. Tappo metallico non perforabile. |
| LC-4678 | 10 flaconi pronti da 250 mL | 180 ± 5 mL | 1 scatola con 10 flaconi da 250 mL. Tappo metallico non perforabile. |
Composizione
| Componente | g/L |
|---|---|
| Peptone di caseina | 10,0 |
| Piruvato di sodio | 10,0 |
| Glicina | 12,0 |
| Estratto di carne | 5,00 |
| Cloruro di litio | 5,00 |
| Estratto di lievito | 1,00 |
| Agar | 17,0 |
Controllo qualità
Controllo fisico-chimico
| Colore | Giallo |
|---|---|
| pH | 7,2 ± 0,2 a 25 °C |
Controllo microbiologico
Aggiungere tuorlo d'uovo e tellurito - inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ (selettività).
Distribuire in piastre il terreno completo, raffreddato a 50 °C.
Aerobiosi. Incubazione a 37 ± 1 °C, lettura dopo 24/44 ± 4 h.
| Microrganismo | Crescita |
|---|---|
| Stph. aureusATCC 25923, WDCM 00034 | Buona. Colonie nere/grigie con alone. Lecitinasi (+) |
| Escherichia coliATCC 8739, WDCM 00012 | Inibito |
| Staphylococcus aureusATCC 6538, WDCM 00032 | Buona. Colonie nere/grigie con alone. Lecitinasi (+) |
| Stph. epidermidisATCC 12228, WDCM 00036 | Colonie nere/grigie senza alone. Lecitinasi (-) |
| Stph. saprophyticusATCC 15305, WDCM 00159 | Colonie nere/grigie senza alone. Lecitinasi (-) |
LC-4678, flaconi da 250 mL: controllo microbiologico
Aggiungere il supplemento per la prova di funzionalità - inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ (selettività).
Distribuire in piastre il terreno completo, raffreddato a 50 °C.
Aerobiosi. Incubazione a 37 ± 1 °C, lettura dopo 24/44 ± 4 h.
| Microrganismo | Crescita |
|---|---|
| Stph. aureusATCC 25923, WDCM 00034 | Buona. Colonie nere/grigie con alone. Lecitinasi (+) |
| Escherichia coliATCC 8739, WDCM 00012 | Inibito |
| Staphylococcus aureusATCC 6538, WDCM 00032 | Buona. Colonie nere/grigie con alone. Lecitinasi (+) |
| Stph. epidermidisATCC 12228, WDCM 00036 | Colonie nere/grigie senza alone. Lecitinasi (-) |
| Stph. saprophyticusATCC 15305, WDCM 00159 | Colonie nere/grigie senza alone. Lecitinasi (-) |
Controllo di sterilità
Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.
Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.
Bibliografia
- ATLAS R.M. & L.C. PARKS (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press. London.
- BAIRD-PARKER, A.C. (1962) An improved diagnostic and selective medium for isolating coagulase-positive staphylococci. J. Appl. Bact. 25:12.
- COLIPA (1997) Guidelines on Microbial Quality Management (MQM). Brussels.
- DOWNES, F.P. & K. ITO (2001) Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4th ed. APHA. Washington. USA.
- EUROPEAN PHARMACOPOEIA (2007) 5th ed. Suppl. 5.6 § 2.6.13 Microbiological examination of non-sterile products. EDQM. Council of Europe. Strasbourg.
- FIL-IDF 60:2001 Standard. Lait et produits à base de lait - Detection des staphylocoques à coagulase positive - Technique du nombre le plus probable. Brussels.
- ISO 5944:2001 Standard. Milk and Milk based products - Detection of coagulase positive staphylococci - MPN Technique. Geneva.
- ISO 6888-1:1999/Amd 2:2018. Standard. Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species) - Part 1 Technique using Baird-Parker Agar medium. Amendment 2: Inclusion of an alternative confirmation test using RPFA stab method.
- ISO 6888-2:1999 Standard. Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci - Part 1 Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium. Geneva.
- ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
- ISO 22718 Standard (2015). Cosmetics - Microbiology - Detection of Staphylococcus aureus.
- USP 31 - NF 26 (2008) <61> Microbial Limit Tests. US Pharmacopeial Conv. Inc. Rockville. MD. USA.
- ZANGERL, P. & H. ASPERGER (2003) Media used in the detection and enumeration of Staphylococcus aureus. In Handbook.
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