Milk Plate Count Agar (PCA) ISO

Descrizione

Grazie alla concentrazione di agar più bassa, si può usare con il metodo per inclusione o con il metodo per spatolamento.

Tecnica

Per l'uso, il contenuto del flacone va versato in piastre. Il terreno di coltura va fuso secondo le istruzioni del produttore, a bagnomaria (100 °C) o nel forno a microonde. Non applicare mai calore diretto per fondere un terreno. Le temperature e i tempi di fusione dipendono dalla forma del contenitore, dal volume di terreno e dalla fonte di calore. Prima di fondere qualsiasi terreno, allentare il tappo a vite del contenitore per evitare che si rompa. Il terreno va fuso una sola volta e poi usato. I terreni con agar non vanno fusi più volte, perché le loro caratteristiche cambiano a ogni nuova fusione. Il surriscaldamento va evitato quanto il riscaldamento prolungato, soprattutto per i terreni a pH acido o alcalino. Una volta fuso il terreno, versare le piastre con tecniche asettiche. Per l'inoculo seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili: metodo di semina a spirale, semina per striscio, metodi ecometrici, serie di diluizioni, spatolamento, ecc.

Tecnica d'uso raccomandata

Preparare diluizioni seriali decimali del campione, prelevare da ogni diluizione 1 mL in aliquote doppie e porle in piastre di Petri sterili. Versare in ogni piastra circa 20 mL di terreno sterile raffreddato (a circa 45 °C). Mescolare delicatamente ruotando la piastra a forma di 8. Lasciare solidificare le piastre senza muoverle e incubarle capovolte. Il tempo e la temperatura di incubazione dipendono dal tipo di microrganismo ricercato. In generale, per una conta degli aerobi, incubare per 3 giorni a 30 °C, controllando le piastre a 24, 48 e 72 ore.

Il metodo di conta in piastra proposto dall'APHA è il metodo per inclusione, cioè il versamento dell'agar fuso a 50 °C su piastre che contengono i campioni diluiti. La conta finale si esegue dopo 48 ore di incubazione a 32-35 °C.

Per i microrganismi con altre esigenze di temperatura sono state suggerite le incubazioni seguenti: 2 giorni a 32-35 °C, 2-3 giorni a 45 °C, 2 giorni a 55 °C, 3-5 giorni a 20 °C, 7-10 giorni a 5-7 °C.

Le diluizioni dei campioni si preparano, secondo la loro natura, con soluzione di Ringer 1/4, Buffered Peptone Water o Maximum Recovery Diluent.

Il metodo di conta per inclusione è preferito al metodo di inoculo in superficie, perché dà conte più alte, anche se quest'ultimo facilita l'isolamento e il trapianto delle colonie.

Controllo fisico-chimico

LC-5172, flaconi da 125 mL: controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Fondere il terreno - preparare le piastre - semina a spirale: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività).

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Aerobiosi. Incubazione a 30 ± 1 °C, lettura a 24-48-72 h.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• ATLAS, R.M. & L.C. PARKS (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London.
• BUCHBINDER, L., Y. BARIS & L. GOLDSTEIN (1953) Further studies on new milk-free media for the standard plate count of dairy products. Am. J. Public Health 43:869-872.
• CLESCERI, L.S., A.E. GREENBERG and A.D. EATON (1998) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 20th ed., APHA, AWWA & WPCF. Washington.
• DIN 10192 (1971) Prüfungsbestimmungen für Milch und Milcherzeugnisse. Deutsche Landwirtschaft, Fachbereit und Ernahrung.
• DOWNES, F.P. & K. ITO (2001) Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4th ed., APHA, Washington.
• FIL/IDF Standards 3 (1958), 100, 101 (1981), 109 (1982) and 132 (2004).
• HORWITZ, W. (2000) Official Methods of Analysis of the A.O.A.C. AOAC International. Gaithersburg. Va.
• IFU Method No 6 (1996) Mesophilic, thermoduric and thermophilic bacteria: Spores Count. D-1 Mesophilic Aerobic Sporeforming bacteria: Spores count.
• ISO 4833 (2003) Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of microorganisms. Colony count technique at 30 °C.
• ISO 8552 (2004) Milk - Estimation of psychrotrophic microorganisms. Colony count technique at 21 °C (Rapid method).
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
• ISO 17410 (2001) Horizontal method for the enumeration of psychrotrophic microorganisms.
• MARSHALL, R.T. (1992) Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 16th ed. APHA. Washington.
• PASCUAL ANDERSON, Mª R. (1992) Microbiología Alimentaria. Díaz de Santos, S.A. Madrid.