Chapman TTC Agar (Tergitol 7 Agar)

Tecnica

Quando si usa la tecnica di filtrazione su membrana per l'identificazione presuntiva dei coliformi nelle acque, va tenuto presente che il volume minimo da filtrare dipende dal tipo di acqua analizzata. Se necessario, diluire con tampone fosfato sterile per ottenere sulla membrana un numero di colonie adatto alla conta.

Per ogni campione di acqua si devono filtrare due volumi su due membrane diverse e incubarli su Chapman TTC Agar rispettivamente a 35 °C e a 44 °C.

Dopo 48 ore le colonie tipiche hanno l'aspetto seguente:

• Escherichia coli, Citrobacter spp.: gialle con un nucleo arancione al centro sotto il filtro a membrana (MF).
• Klebsiella spp.: rosso mattone o gialle senza nucleo. Il terreno sotto il filtro (MF) è giallo.
• Enterobacter spp.: giallo scuro o rosso mattone con un nucleo arancione. Anche il terreno è giallo.
• Non fermentanti il lattosio: colonie viola o indaco. Il terreno diventa blu.

La maggior parte dei coliformi non cresce su questo terreno quando è incubata a 44 °C, tranne E. coli, che forma una colonia dall'aspetto caratteristico.

I risultati si esprimono sempre per 100 mL di campione, tenendo conto delle eventuali diluizioni. La stima si fa considerando le colonie tipiche cresciute a 35 °C come coliformi fecali, insieme a quelle cresciute a 44 °C come E. coli. Tuttavia, secondo la legislazione e nonostante la selettività del terreno, i risultati si possono considerare solo presuntivi e tutte le colonie di coliformi vanno confermate secondo i criteri seguenti:

Aspetto tipico su EMB Agar o Endo Agar Base e reazioni caratteristiche su Kligler Iron Agar.

Per la conferma di E. coli fecale si verificano le caratteristiche seguenti: bacillo Gram-negativo mobile, fermentante il lattosio con produzione di acido e gas, negativo alla prova del citrato e positivo alla produzione di indolo.

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi da filtrare secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Nota: a seconda del campione e delle specifiche possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse.

Dopo l'incubazione, contare le colonie giallastre come E. coli presuntivo o come qualsiasi altro coliforme.

Calcolare la carica microbica totale per mL di campione moltiplicando il numero medio di colonie per membrana per l'inverso del fattore di diluizione. Riportare i risultati come unità formanti colonia (UFC) per mL, insieme al tempo e alla temperatura di incubazione.

La rilevazione di E. coli va confermata con ulteriori prove microbiologiche o biochimiche.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Filtrazione su membrana / intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC per la selettività.

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Aerobiosi. Incubazione a 36 ± 2 °C, lettura a 21 ± 3 h.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• ATLAS, R.M., L.C. PARKS (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London.
• CHAPMAN G.H. (1951) A culture medium for detecting and confirming E. coli in ten hours. Am. J. Publ. Hlth 41:1381-1386.
• DOWNES, F.P. & K. ITO (2001) Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 3rd ed. APHA. Washington.
• GUINEA, SANCHO, PARES (1979) Análisis Microbiológico de Aguas. Ed. Omega. Barcelona.
• ISO 9308-1:2000 Standard. Water Quality - Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria - Part 1: Membrane filtration method.
• SPECK, M (Ed.) (1982) Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. Washington.