Legionella BCYE with AB Agar ISO

Descrizione

Il terreno è composto da un terreno base integrato con fattori di crescita (BCYE Agar) e dal terreno selettivo integrato con inibitori della flora accompagnatrice indesiderata. L'estratto di lievito fornisce i nutrienti di base, perché il terreno non contiene carboidrati fermentabili. La L-cisteina, il pirofosfato ferrico e l'alfa-chetoglutarato sono aggiunti per soddisfare le esigenze nutrizionali specifiche delle specie di Legionella.

Il carbone attivo decompone il perossido di idrogeno, un prodotto metabolico tossico, e può anche catturare la CO₂ e modificare la tensione superficiale. L'aggiunta del tampone aiuta a mantenere il pH adatto alla crescita ottimale. La selettività aumenta con l'aggiunta di cefazolina sodica, che agisce contro i batteri Gram-positivi, di polimixina B, che inibisce i batteri Gram-negativi, e di natamicina, che come agente antifungino inibisce la crescita dei lieviti.

Tecnica

Fare riferimento alla norma ISO 11731:2017 o ad altre procedure normalizzate per ottenere colonie isolate dai prelievi e dai campioni. Lasciare riposare le piastre inoculate finché l'inoculo non è stato assorbito. Capovolgere le piastre e incubare a 36 ± 2 °C fino a 2, 3, 5-10 giorni. Per mantenere umida l'atmosfera dell'incubatore, mettere una vaschetta d'acqua sul fondo dell'incubatore. Rabboccare la vaschetta con acqua fresca (se necessario) ogni volta che si esaminano le piastre. L'incubazione in atmosfera d'aria con il 2,5 % (frazione di volume) di CO₂ può favorire la crescita di alcune Legionella, ma non è essenziale.

Esaminare le piastre con un microscopio per piastre almeno tre volte, a intervalli di 2, 3 e fino a 5 giorni, durante il periodo di incubazione di 10 giorni, perché Legionella cresce lentamente e può essere mascherata dalla crescita di altri microrganismi. Registrare il numero di ciascun tipo di colonia presente.

Le colonie di Legionella sono spesso di colore bianco-grigio-blu-porpora, ma possono essere marroni, rosa, verde lime o rosso intenso. Sono lisce, con bordi regolari, e hanno un caratteristico aspetto a vetro smerigliato. Alla luce ultravioletta le colonie di diverse specie hanno un'autofluorescenza bianca brillante, altre sono rosse e L. pneumophila appare verde opaco, spesso con sfumature gialle. Tutte le colonie presuntive vanno confermate con metodi colturali, biochimici, sierologici o genetici.

Nota: se il terreno si usa con il metodo della membrana filtrante, il colore e la crescita delle colonie possono essere alterati. È consigliabile che il tecnico esegua una validazione della membrana filtrante usata.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Semina a spirale / metodi MF: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Aerobiosi. Incubazione a 36 ± 2 °C. Lettura a 3-5 giorni, fino a 10 giorni.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

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